線粒體作為細胞的“能量工廠”,其功能高度依賴線粒體DNA(mtDNA)的完整性,。mtDNA拷貝數(shù)(每個細胞中mtDNA的分子數(shù))不僅是評估線粒體功能的金標準,,更與衰老、代謝紊亂,、神經(jīng)退行性疾病及癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),。隨著精準醫(yī)學的興起,mtDNA拷貝數(shù)檢測技術(shù)已成為疾病診斷,、機制研究和藥物開發(fā)的核心工具,。
檢測原理
試劑盒巧妙運用雙色熒光 TaqMan 探針法定量 PCR 技術(shù)。
細胞內(nèi)線粒體檢測時,,FAM 熒光精準追蹤線粒體拷貝數(shù),,HEX熒光同步記錄細胞數(shù)目,二者協(xié)同,,依托標準曲線,,勾勒出線粒體在細胞內(nèi)的真實分布圖。
而游離線粒體檢測,,FAM 熒光專注計算線粒體拷貝數(shù),,HEX熒光則化身質(zhì)檢員,對游離基因組 DNA 抽提質(zhì)量嚴格把關(guān),,確保檢測結(jié)果的可靠性,。
基于實時熒光定量PCR(qPCR)的檢測方案,通過以下創(chuàng)新實現(xiàn)了技術(shù)躍升:
1) 特異性探針設(shè)計:針對mtDNA保守區(qū)域設(shè)計引物與探針,,避免核基因組DNA干擾,,特異性高達99.9%。
2) 雙標準曲線校準:引入梯度稀釋的標準品和校正品,,構(gòu)建動態(tài)范圍覆蓋1~10^6拷貝的定量曲線,,檢測下限低至1拷貝/μL。
3) 自動化數(shù)據(jù)分析:結(jié)合AI算法優(yōu)化閾值循環(huán)(Ct值)判定,,減少人為誤差,,提升重復(fù)性(CV值<5%)。
實力見證:科研與臨床的雙重認可
在細胞內(nèi)線粒體拷貝數(shù)檢測的科研戰(zhàn)場上,,清晰描繪出線粒體拷貝數(shù)隨年齡增長的變化軌跡,,為衰老機制研究提供關(guān)鍵證據(jù)。
而在游離線粒體領(lǐng)域,,通過嚴謹?shù)?/span> spearman 相關(guān)系數(shù)分析,,試劑盒精準揭示出游離線粒體與年齡、性別的微妙關(guān)系,為相關(guān)研究提供了重要參考,,助力科研人員深入探究線粒體在不同生理狀態(tài)下的奧秘,。
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