活細胞相差、熒光顯微時間序列動態(tài)觀察采集是細胞生物學研究中的重要技術手段,，可實時觀察活細胞的動態(tài)變化,，以下是具體介紹：

原理：相差顯微鏡是利用光線通過透明標本時產生的光程差（即相位差）轉化為振幅差（即亮度差），使無色透明的細胞結構變得清晰可見,，無需染色就能觀察活細胞形態(tài)。熒光顯微鏡則是通過特定波長的激發(fā)光照射熒光標記的細胞,，使熒光物質發(fā)出熒光,，從而觀察細胞內特定結構或分子的分布與動態(tài)變化。時間序列動態(tài)觀察采集是在不同時間點連續(xù)拍攝,，記錄細胞隨時間的變化過程,。

設備要求：

顯微鏡：可選擇具備相差和熒光功能的倒置顯微鏡，如尼康 Ti2-E 全自動活細胞顯微成像系統(tǒng),，其具有大視野、高速成像,、高分辨率等特點,，可進行明場 / 熒光圖像采集和時間序列成像。也可選擇激光共聚焦顯微鏡,，如蔡司 LSM 800,，能實現(xiàn)高分辨率的熒光成像，還可進行光切片采集和三維重建,，適合觀察細胞內部結構的動態(tài)變化,。

相機：需配備高靈敏度相機,，如 CMOS 或 sCMOS 相機,。sCMOS 相機量子效率高，可在低光照條件下獲得清晰圖像,，減少光毒性對活細胞的影響,，還能實現(xiàn)高速成像，滿足時間序列采集需求,。

環(huán)境控制裝置：活細胞長時間觀察需要穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境，因此顯微鏡需配備溫控培養(yǎng)系統(tǒng),、CO?培養(yǎng)箱等,，以維持細胞生存所需的溫度,、濕度和氣體環(huán)境,。

操作流程：

樣品準備：將待觀察的活細胞接種于合適的培養(yǎng)器皿中,，如培養(yǎng)皿、多孔板等,。若進行熒光觀察,，需根據(jù)研究目的用相應的熒光染料對細胞進行標記，標記方法可根據(jù)染料說明書進行操作,，標記后將細胞置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間,，使細胞狀態(tài)穩(wěn)定。

顯微鏡設置：將培養(yǎng)器皿放置在顯微鏡載物臺上,，開啟顯微鏡及相關附件，如光源,、相機,、環(huán)境控制裝置等。選擇相差模式,，調節(jié)焦距和光圈等參數(shù),，使細胞圖像清晰可見。若進行熒光觀察,，根據(jù)熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長,，選擇合適的熒光通道和濾光片組合。

時間序列參數(shù)設置：設置采集時間間隔和總采集時間,，時間間隔可根據(jù)細胞變化速度確定，如細胞分裂速度較慢,，可設置幾分鐘甚至幾十分鐘采集一次,；對于快速變化的過程,，如鈣離子信號傳導，可能需要每秒甚至更高頻率采集,?？偛杉瘯r間根據(jù)實驗目的而定，可從數(shù)小時到數(shù)天不等,。同時，開啟自動對焦功能,，確保在長時間采集過程中細胞始終處于焦平面上,。

圖像采集：設置好參數(shù)后，啟動時間序列采集程序,，相機將按照設定的時間間隔自動拍攝圖像,，記錄細胞的動態(tài)變化過程。采集過程中,，可實時查看圖像,，確保采集正常進行,。

數(shù)據(jù)處理與分析：采集完成后，可使用顯微鏡配套的圖像分析軟件,，對時間序列圖像進行處理和分析,，如自動識別細胞、追蹤細胞運動軌跡,、量化熒光強度變化,、分析細胞增殖或凋亡率等，還可將圖像制作成動態(tài)視頻,，直觀展示細胞的變化過程。