一：細胞與試劑方面

1、細胞(單層細胞,，鏡檢合適)

2,、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細胞有要求的培養(yǎng)液)

3、滅活小牛血清,、慶大霉素溶液（1 萬單位）

4,、7.5％NaHC03 溶液

5、0.25％胰蛋白酶

6,、 PBS 洗液,。

二：試驗小用具方面

1、小方瓶(100m1)

2,、克氏瓶

3,、膠塞

4、吸管(10ml,、1m1）

5,、細胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

6、C02 孵箱

7,、超凈臺

8,、倒置顯微鏡

9、4℃,、- 20℃冰箱

三：細胞傳代的操作過程

1,、挑選細胞：鏡檢細胞，挑選成長狀態(tài)杰出,，細胞界限清晰,，具有立體感，形狀好無污染,、無反常及可疑病變細胞,。

2、制造細胞培養(yǎng)液：按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),，參加滅活小牛血清10m1,，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml,。（僅供一般參考）,。

3、消化細胞：先用PBS 洗液沖刷細胞外表1-2 次,，每次10m1,，棄去洗液,，向細胞瓶內(nèi)參加0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1,，細胞瓶平放,，使消化液覆蓋細胞外表。

4,、至細胞脫落到胰酶中：每瓶參加10m1 細胞培養(yǎng)液吹打渙散細胞,，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再參加10m1 細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝,，然后補加至所需培養(yǎng)量,。

5、加塞,，置于37±1℃孵箱培養(yǎng),。約2～4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

6,、填寫傳代記錄,。