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微生物采樣過程中如何避免交叉污染,？

來源：杭州華端生物科技有限公司 2025年06月29日 16:51

在微生物采樣過程中,，交叉污染可能源于設備殘留,、人員操作,、環(huán)境微生物或樣本間相互污染，需從全流程實施嚴格的防污染措施,。以下是分場景的標準化操作指南及技術(shù)要點：

一,、采樣前的設備與耗材滅菌

1.硬件滅菌規(guī)范

可重復使用設備：

金屬采樣頭（如撞擊式采樣器）：121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘（GB/T38512-2020），或使用70%乙醇+火焰灼燒（適用于現(xiàn)場應急處理）,。

塑料部件（如采樣泵管路）：用0.1%過氧乙酸浸泡30分鐘,，再用無菌水沖洗3次，晾干后紫外照射（254nm,，≥30分鐘）,。

一次性耗材：

培養(yǎng)皿、采樣袋等需選用輻照滅菌產(chǎn)品（鈷-60照射,，劑量≥25kGy）,，拆封前檢查包裝完整性（ISO11607-1標準）。

2.滅菌效果驗證

每次滅菌后進行生物監(jiān)測：放入嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953孢子條,，滅菌后培養(yǎng)（56℃,，48小時），菌落數(shù)應為0（GB8599-2021）,。

二、采樣現(xiàn)場的操作防污染體系

1.人員無菌操作準則

三級防護要求：

普通環(huán)境：穿戴一次性實驗服+醫(yī)用手套（如丁腈手套）,，采樣前用75%乙醇擦拭手套表面,。

高風險環(huán)境（如臨床樣本）：需穿戴無菌隔離衣+護目鏡+雙層手套，每采樣1次更換外層手套,。

動作規(guī)范：

采樣時手臂避免越過采樣口上方,，保持采樣頭距身體≥30cm，呼吸方向與采樣口呈90°夾角,。

禁止在采樣區(qū)域內(nèi)整理頭發(fā),、觸摸面部，如需調(diào)整設備,，需先更換手套或消毒手部,。

2.空間分區(qū)與氣流控制

采樣區(qū)劃分：

設置50cm×50cm的無菌操作區(qū)，用75%乙醇噴灑桌面形成消毒帶,，采樣器放置于區(qū)域中央,。

高潔凈度場景（如ISO5級潔凈室）需在層流工作臺（風速0.36-0.54m/s）或生物安全柜（BSC-II級）內(nèi)操作。

氣流干擾控制：

采樣前關(guān)閉門窗,，停止空調(diào)系統(tǒng)運行10分鐘（避免氣流攜帶外源微生物）,，人員走動控制在1米外,。

三、樣本采集過程的隔離措施

1.分批次采樣防交叉方案

批次間隔消毒：

每完成1個樣本采樣后,，用75%乙醇擦拭采樣器外殼,、采樣口及操作臺面，作用5分鐘后再進行下一樣本采集,。

若采集不同類型樣本（如環(huán)境樣本與臨床樣本）,，需更換全套采樣頭及管路，避免殘留微生物混淆,。

2.特殊樣本的隔離技術(shù)

高濃度樣本處理：

處理污水,、糞便等高負荷樣本時，使用帶負壓過濾的采樣器（如MilliporeEZ-Pak）,，采樣后立即密封濾芯,，防止氣溶膠擴散。

致病菌采樣：

采用生物安全型采樣頭（如帶HEPA過濾的閉合式采樣器）,，采樣后放入防漏金屬罐（內(nèi)層鋪吸水紙+0.5%次氯酸鈉溶液）,。

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