判斷 TrypLE Express 酶的消化效果,,可從細(xì)胞形態(tài),、細(xì)胞活力、細(xì)胞回收率等多個(gè)維度進(jìn)行綜合評(píng)估,,以確保細(xì)胞后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利開展,。
顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài):在酶消化過程中及終止消化后,將培養(yǎng)皿置于倒置顯微鏡下觀察,,是判斷消化效果最直觀的方法,。若細(xì)胞貼壁緊密時(shí),呈多邊形或不規(guī)則形狀,,相互連接成片,。隨著消化進(jìn)行,,理想的消化效果表現(xiàn)為細(xì)胞逐漸變圓,從培養(yǎng)皿表面松動(dòng),,部分細(xì)胞開始懸浮,。若細(xì)胞過度消化,會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞膜破裂,、細(xì)胞碎片增多的現(xiàn)象,;若消化不足,則細(xì)胞仍大量貼壁,,僅有少量細(xì)胞變圓,。通過觀察細(xì)胞形態(tài)變化,可及時(shí)判斷消化程度,,并調(diào)整消化時(shí)間 ,。例如,觀察 HeLa 細(xì)胞消化情況時(shí),,當(dāng)約 80% - 90% 的細(xì)胞變圓,,且輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿有細(xì)胞開始脫離時(shí),說明消化效果較好,;若大部分細(xì)胞仍緊密貼壁,,表明消化時(shí)間不足;若視野中出現(xiàn)大量破碎的細(xì)胞殘片,,則意味著過度消化,。
檢測(cè)細(xì)胞活力:細(xì)胞活力是衡量消化效果的關(guān)鍵指標(biāo),直接關(guān)系到后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成敗,。常用的檢測(cè)方法如臺(tái)盼藍(lán)染色法,,活細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整,能排斥臺(tái)盼藍(lán)而不被染色,,死細(xì)胞則因細(xì)胞膜通透性增加,,被染成藍(lán)色。通過計(jì)數(shù)染色細(xì)胞與未染色細(xì)胞的比例,,可計(jì)算細(xì)胞活力,。正常情況下,經(jīng) TrypLE Express 酶合理消化后的細(xì)胞,,活力應(yīng)保持在 90% 以上,。此外,還可采用 CCK - 8,、MTT 等方法檢測(cè)細(xì)胞代謝活性,,間接反映細(xì)胞活力。若消化過程對(duì)細(xì)胞造成較大損傷,,細(xì)胞活力會(huì)顯著下降,,影響后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng),、增殖、分化等實(shí)驗(yàn) ,。
評(píng)估細(xì)胞回收率:細(xì)胞回收率反映了消化過程中細(xì)胞的損失程度,。在消化完成后,收集所有細(xì)胞懸液,,通過細(xì)胞計(jì)數(shù)(如使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀)計(jì)算回收的細(xì)胞數(shù)量,,并與消化前的細(xì)胞數(shù)量對(duì)比,得出細(xì)胞回收率,。一般來說,,較高的細(xì)胞回收率意味著消化過程對(duì)細(xì)胞的損傷較小,消化效果良好,。若細(xì)胞回收率過低,,可能是消化時(shí)間過長、酶濃度過高導(dǎo)致細(xì)胞損傷,,或是消化不充分,,部分細(xì)胞未能從培養(yǎng)表面有效解離 。
觀察細(xì)胞再貼壁及生長情況:將消化后的細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)器皿中,,觀察細(xì)胞的再貼壁及后續(xù)生長情況,,也是判斷消化效果的重要依據(jù)。消化效果好的細(xì)胞,,在接種后 2 - 4 小時(shí)內(nèi)開始貼壁,,24 小時(shí)后細(xì)胞基本貼壁,并呈現(xiàn)出正常的生長形態(tài),,開始增殖,。若細(xì)胞貼壁緩慢,或貼壁后形態(tài)異常,、生長緩慢,,甚至出現(xiàn)大量死亡,說明消化過程可能對(duì)細(xì)胞造成了不良影響,,導(dǎo)致細(xì)胞功能受損,,影響其正常的生長和增殖能力 。
分析細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá):對(duì)于一些對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物要求較高的實(shí)驗(yàn),,如細(xì)胞分選、免疫細(xì)胞研究等,,可通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況來判斷消化效果,。TrypLE Express 酶若消化過度,可能會(huì)破壞細(xì)胞表面抗原決定簇,,導(dǎo)致標(biāo)志物表達(dá)降低或丟失,。通過對(duì)比消化前后細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平,,若標(biāo)志物表達(dá)無明顯變化,表明消化過程未對(duì)細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)造成嚴(yán)重破壞,,消化效果良好,;反之,則說明消化條件可能需要優(yōu)化 ,。