氨基酸自動分析儀從樣品處理到結果輸出的標準化手冊

來源：上海純華生物科技有限公司 2025年06月25日 10:55

　　氨基酸自動分析儀通過離子交換色譜與柱后衍生技術,，可實現(xiàn)食品、生物樣本中氨基酸的精準定量,。本文以蛋白質水解樣品檢測為例,，系統(tǒng)梳理其操作步驟與關鍵注意事項，助力用戶高效完成分析任務,。

　　一,、前期準備：試劑與儀器校準

　　1.試劑配置

　　緩沖液：按說明書配制pH2.2、3.3,、4.0的檸檬酸-磷酸鈉緩沖液,，0.45μm濾膜過濾后超聲脫氣15分鐘,。

　　衍生試劑：稱取茚三酮溶于乙二醇甲醚,，加入氯化亞錫（抗氧化劑），現(xiàn)配現(xiàn)用,，避光保存,。

　　標準品：用0.02N鹽酸溶解氨基酸混合標準品，配制成0.5-10μmol/L梯度溶液,。

　　2.儀器檢查

　　開啟氮氣（壓力0.05-0.1MPa）,、純水機及儀器電源，預熱30分鐘,。

　　檢查泵頭無氣泡,、色譜柱連接緊密，用超純水沖洗管路至基線平穩(wěn),。

　　二,、樣品處理：水解與衍生化

　　1.蛋白質水解

　　稱取50-100mg樣品于水解管，加入10mL 6N鹽酸及0.5mL苯酚（指示劑）,，充氮氣后密封,。

　　110℃水解22-24小時，冷卻后過濾,，取1mL濾液60℃真空干燥,，用0.02N鹽酸復溶至10mL，過0.22μm濾膜,。

　　2.游離氨基酸提取

　　血清,、尿液等液體樣品直接與4%磺基水楊酸按1:3混合，4℃離心（12000rpm，10分鐘）,，取上清液稀釋至檢測范圍,。

　　三、儀器操作：參數(shù)設置與運行

　　1.方法建立

　　在軟件中設置梯度洗脫程序：0-10分鐘緩沖液A（pH2.2）,，10-30分鐘線性切換至B（pH3.3）,，30-50分鐘切換至C（pH4.0），流速0.45mL/min,。

　　衍生溫度115℃,，檢測波長570nm（主）、440nm（副）,，進樣量20μL,。

　　2.序列運行

　　將標準品與樣品按順序放入自動進樣器，啟動序列,。儀器自動完成進樣,、分離、衍生及檢測,，生成色譜圖,。

　　四、數(shù)據(jù)分析與報告生成

　　1.定性定量

　　通過保留時間比對標準品色譜圖,，定性氨基酸種類,；以外標法或內標法計算濃度，回收率需達95%-105%,。

　　2.報告輸出

　　軟件自動生成Excel或PDF報告,，包含樣品名稱、濃度,、RSD值及色譜圖,。異常峰需手動檢查是否為雜質或共洗脫峰。

　　五,、儀器維護與注意事項

　　1.日常維護

　　每日用超純水沖洗泵及管路,，每周更換保護柱芯，每月校準儀器線性度（R2≥0.999）,。

　　2.故障處理

　　若基線漂移,，檢查茚三酮溶液是否氧化；若峰形拖尾,，用0.1N NaOH沖洗色譜柱30分鐘,。

　　氨基酸自動分析儀通過標準化操作流程，可實現(xiàn)ppb級檢測限與±2% RSD的重復性,。從樣品前處理到數(shù)據(jù)輸出,，每一步均需嚴格遵循參數(shù)設置與質量控制要求,，以確保分析結果的準確性與可靠性。

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