人S100A9蛋白（S100A9）ELISA試劑盒

 （用于血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗人 S100A9 單抗包被于酶標(biāo)板上,，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 S100A9與單抗結(jié)合,，加入生物素化的抗人S100A9,，形成免疫復(fù)合物連接在板上,，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色,，后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值,，S100A9濃度與OD值成正比,，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中S100A9濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.          收集標(biāo)本：血清,、血漿（EDTA,、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測(cè),，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存,，避免反復(fù)凍融,。

2.          標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成8000pg/ml的溶液,。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,，每管加入標(biāo)本稀釋液300ul,。在*管中加入8000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管,。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?/span>300ul棄去,。第八管為空白對(duì)照。

3.          10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)?/span>示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）,。

4.         洗滌液：用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?/span>1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測(cè)程序

1.          加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.          洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,，向?yàn)V紙上印干,。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘,。

4.          洗板：同前,。

5.          每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘,。

6.          洗板：同前,。

7.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘,。

8.          每孔加入100ul終止液混勻,。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算,。

2.          以標(biāo)準(zhǔn)品4000,、2000、1000,、500,、250、125,、62.5,、0 pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上作圖,，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)S100A9含量,。

試劑盒性能

             1.   靈敏度：小的S100A9 檢測(cè)濃度小于30pg/ml,。

2.        特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人S100A9    。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng),。

3.        重復(fù)性：板內(nèi),、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10％。

注意事項(xiàng)

             1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

 2.   洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

             3.   板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,，保持板條干燥,。

             4.   本試劑盒宜置4^oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！