一、背景

胰蛋白胨膽鹽瓊脂是一種常用于大腸桿菌的膜過濾法選擇性培養(yǎng)（ISO標準）的培養(yǎng)基。胰蛋白胨膽鹽瓊脂的成分包括：蛋白胨,，氯化鈉，膽鹽,，瓊脂和pH緩沖液（pH值為9.0±0.1）,。

二,、胰蛋白胨膽鹽瓊脂操作步驟

1、按國家標準,、SN標準,、FDA標準或其它方法制備樣品液；

2,、稱取36.5g的本品加熱溶解于1000ml蒸餾水中,，然后分裝，在121℃的高壓滅菌器中滅菌15分鐘,，之后便可備用,。；

3,、用3mm接種環(huán)取待測液體,，劃線接種到胰蛋白胨膽鹽瓊脂培養(yǎng)基上，做2個平板,；

4,、37℃培養(yǎng)18-24h，大腸埃希氏菌菌顯無色菌落,，產(chǎn)氣腸桿菌和陰溝腸桿菌顯黃色或無色,。

三、胰蛋白胨膽鹽瓊脂注意事項

1,、使用瓊脂糖需要加溫,，請做好必要的防護措施，避免燙傷,。

2,、強烈建議您不要將瓊脂糖粉末直接倒入沸水中，這樣做會引起爆沸,，濺出,，致使?jié)舛认陆担€會造成結(jié)塊而融化困難,。正確的做法是稱量一定量瓊脂糖至三角瓶中,，根據(jù)配制濃度加入一定量的緩沖液(與電泳緩沖液一致)，加蓋硅膠塞（防止溫度差別造成表面結(jié)膜）,，微波或其他方式加熱至沸騰2分鐘左右,，戴手套小心取出，搖勻,，使之溶解,。

3、必須保證瓊脂糖溶解,，否則造成電泳條帶不清,，保證溶解的前提下,，盡量縮短加熱時間

4、室溫凝固后,，即可使用,。如不立即使用請用保鮮膜封好，4℃冷藏,，可保存5天,。

四、應用

胰蛋白胨膽鹽瓊脂可以用于比色法快速檢測食品中大腸菌群的研究：

大腸菌群是食品檢驗中的指標之一,。大腸菌群是指在37℃環(huán)境下能發(fā)酵乳糖,，產(chǎn)酸產(chǎn)氣的一群需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。目前普遍采用的大腸菌群的檢測方法為多管發(fā)酵法,。雖然傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法檢測大腸菌群數(shù)具有準確,、可靠等優(yōu)點，但是在食品和水質(zhì)的監(jiān)測過程中,，或在檢測樣品多和檢測時間緊的情況下,，由于其檢測時間較長，已越來越不能滿足實際監(jiān)測的需要了,。

利用大腸菌群的培養(yǎng)共性,，對基于顏色特征識別的大腸菌群的快速計數(shù)法進行研究。

主要研究內(nèi)容和成果如下：

1,、對比色法檢測大腸菌群的顯色培養(yǎng)基配方進行設(shè)計,，確定了以胰蛋白胨膽鹽瓊脂為基礎(chǔ)，通過添加營養(yǎng)物質(zhì),、酸堿指示劑,、抑菌劑、表面活性劑等組分進行優(yōu)化,，篩選出顯色培養(yǎng)基的配方為：LST4.56g,、溴甲酚紫0.03g、1.5%乳糖溶液0.1mL(培養(yǎng)40min后加入),、吐溫0.2%，100mL無菌水,。同時設(shè)計半固體瓊脂培養(yǎng)基,，通過對比不同瓊脂含量對汽包的截留情況，確定了瓊脂含量0.8%時觀察菌體產(chǎn)氣,，確保判斷大腸菌群陽性結(jié)果的準確性,。

2、對大腸菌群數(shù)目與培養(yǎng)液顏色之間的關(guān)系進行研究,，通過測量經(jīng)大腸菌群發(fā)酵產(chǎn)酸后培養(yǎng)基的顏色信息,，采用線性或非線性擬合方法建立大腸菌群數(shù)目與培養(yǎng)基顏色信息之間的模型,，最終確定BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型能夠得到理想的預測結(jié)果，并建立了大腸菌群數(shù)目與顏色對應標準比色板,，適用于食品現(xiàn)場安全監(jiān)察檢測,。

3、對固體類食品,、生活飲用水大腸菌群快速檢測方法進行研究,，最終提供了的比色法定量檢測技術(shù)與檢測結(jié)果如下：

(1)檢測技術(shù)：在無菌條件下準確稱取25g固體樣品，放入到裝有50mL無菌生理鹽水的錐形瓶中,，置于搖床上160r/min振蕩2min,，混勻樣品，用中速定量濾紙過濾樣品勻液,，再用50mL無菌生理鹽水沖洗濾紙上殘留的物質(zhì),，收集濾液。無菌操作吸取6mL菌液通過濾膜進行濃縮,，使菌體在過濾器中分布均勻,，然后將微量移液管貼近濾膜吸取20μL菌液。準確稱取4.56g月桂基磺酸鹽胰蛋白胨培養(yǎng)基于100mL蒸餾水中,，加熱溶解,，加入0.03g溴甲酚紫指示劑和2%的吐溫試劑，振蕩搖勻后以棉塞封口,，放入滅菌鍋中121℃溫度下滅菌20min,。取出置于無菌工作臺上，待溶液冷卻至37℃時調(diào)節(jié)pH值6.99,。用無菌微量移液器吸取1mL培養(yǎng)基放入1.5mL離心管中,，加入濃縮后的待檢液20μL，37℃恒溫箱中培養(yǎng)120min,。培養(yǎng)40min后取出置于工作臺上,，加入1.5%的乳糖溶液100μL，蓋緊離心管的蓋子,，置于恒溫箱中繼續(xù)培養(yǎng),。培養(yǎng)120min后，取出離心管,，觀察發(fā)酵液的顏色,，對照大腸菌群數(shù)-顏色標準比色版讀取大腸菌群數(shù)目的估計值。

(2)檢測結(jié)果：該法在120min內(nèi)即可得到檢測結(jié)果,，且比色法快速檢測大腸菌群結(jié)果與國標法檢測結(jié)果的比值為1.21,，二者無明顯差別，但國標法檢測需72h，該法能明顯縮短檢測時間,，具有一定的靈敏性和真實性,。

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