本文要點：細(xì)菌感染性疾病嚴(yán)重威脅人類生命安全,，亟需開發(fā)簡便、快速、高效且安全的精準(zhǔn)診療協(xié)同技術(shù)。本研究成功合成發(fā)射峰位于1190 nm的近紅外CuInSe?量子點,，經(jīng)ZnS包覆后發(fā)射峰遷移至1026 nm。通過在親水性CuInSe?/ZnS量子點上修飾萬古霉素,，構(gòu)建了可靶向金黃色葡萄球菌的熒光納米探針（Van-CuInSe?/ZnS）,，實現(xiàn)了體內(nèi)細(xì)菌感染進程的實時監(jiān)測。該納米體系兼具優(yōu)異的光熱轉(zhuǎn)換特性和生物相容性,，不僅能實現(xiàn)體內(nèi)細(xì)菌性炎癥的精準(zhǔn)靶向NIR-II熒光成像,，還能有效治療小鼠皮下細(xì)菌感染及創(chuàng)面細(xì)菌感染，在細(xì)菌感染性疾病治療領(lǐng)域展現(xiàn)廣闊應(yīng)用前景,。

活體成像

方案1. 基于Van-CuInSe2/ZnS量子點NIR-II發(fā)光的小鼠細(xì)菌性傳染病監(jiān)測與治療示意圖

本工作中,，通過熱注射法在不同時間合成CuInSe2。隨后,，將薄層ZnS殼包覆至CuInSe2上以保護表面Cu?離子免受氧化并減少表面缺陷,，從而增強了CuInSe2量子點的NIR-II光致發(fā)光強度及光穩(wěn)定性。此外,，CuInSe2/ZnS量子點已成功相轉(zhuǎn)移至水相介質(zhì)并經(jīng)萬古霉素(Van)功能化修飾,，該診斷工具通過特異性結(jié)合細(xì)菌細(xì)胞壁上的D-Ala-D-Ala末端肽，展現(xiàn)出對革蘭氏陽性菌的優(yōu)先選擇性活性,，這不僅促進監(jiān)測細(xì)菌感染與免疫系統(tǒng)的相互作用,，還能在808 nm激光照射下實現(xiàn)體內(nèi)細(xì)菌感染的精準(zhǔn)治療，如方案1所示,。該多功能納米平臺為細(xì)菌感染提供了靶向熒光成像引導(dǎo)的可視化光熱治療,。

圖1. Van-CuInSe2/ZnS QDs的表征

為實現(xiàn)生物成像目的，需通過配體交換使親水功能化的CuInSe?/ZnS量子點與萬古霉素偶聯(lián),，以應(yīng)用于生物體系,，該探針在PBS溶液中具有良好分散性。如圖1A和B所示,，傅里葉變換紅外光譜(FTIR)驗證了CuInSe?@ZnS量子點的MPA與Van表面修飾：在MPA-CuInSe?/ZnS量子點中觀察到~1719 cm?1處MPA分子的C=O特征吸收峰,，在Van-CuInSe?/ZnS量子點中觀察到~1655 cm?1處Van分子的–NH?特征吸收峰，證實MPA與Van已成功組裝于CuInSe?@ZnS表面,。圖1C顯示了配體交換前后CuInSe?與CuInSe?/ZnS量子點的熒光光譜,。CuInSe?量子點的光致發(fā)光強度因表面缺陷和表面Cu?離子氧化而被顯著抑制；引入ZnS后,，在808 nm激發(fā)光下光致發(fā)光峰從1190 nm偏移至1026 nm,，這可能歸因于核/殼界面處形成合金以及CuInSe?量子點表面寬禁帶ZnS薄殼過度生長導(dǎo)致核心CuInSe?有效尺寸收縮。XRD結(jié)果顯示如圖1D所示,，MPA-CuInSe?量子點的特征峰與CuInSe?及CuInSe?/ZnS量子點幾乎重疊,，表明配體交換后未引入異相。

圖2. Van-CuInSe2/ZnS QDs的熱成像實驗

圖4A-D展示了Van-CuInSe?/ZnS量子點在808 nm激光照射下的光熱性能系統(tǒng)性評估（選擇該波長因其對組織、血液和水的低吸收性及皮膚高穿透性）,。使用功率密度0.7 W/cm2的808 nm近紅外激光照射不同濃度Van-CuInSe?/ZnS量子點的PBS溶液時,，溶液溫度隨量子點濃度增加和照射時間延長而快速上升。當(dāng)量子點濃度為0.4 mg/mL時,，10分鐘照射后溫度從21.7°C升至46.6°C,，該溫度可使細(xì)菌生命活動相關(guān)酶失活從而殺菌濃度達1.6 mg/mL時，溶液溫度可達77.9°C,，而純PBS溶液溫度變化可忽略（圖4A）,。選用0.4 mg/mL量子點溶液考察激光功率密度的影響（圖4B）：當(dāng)功率密度從0.7 W/cm2增至1.6 W/cm2時，最終溫度由46.3°C升至71.9°C,。圖4C顯示，經(jīng)過三次照射循環(huán),，溫度-時間曲線未記錄到顯著變化,，證實其優(yōu)異的光熱穩(wěn)定性。圖4D進一步通過熱成像圖直觀呈現(xiàn)了0.7 W/cm2功率密度下不同濃度量子點溶液的溫度分布差異,。綜上,，光熱性能確保了Van-CuInSe?/ZnS量子點作為抗感染治療潛在光熱制劑的應(yīng)用前景。

圖3. 不同處理后金黃色葡萄球菌的成像

采用活/死細(xì)菌細(xì)胞染色分析表征Van-CuInSe?/ZnS量子點的殺菌效果,。存活的金黃色葡萄球菌被DAPI標(biāo)記為藍色熒光,，而死菌則被碘化丙啶(PI)標(biāo)記為紅色熒光。如圖3A所示,，PBS組未檢測到金黃色葡萄球菌的紅色熒光,；相反，經(jīng)Van-CuInSe?/ZnS量子點處理并施加808 nm激光照射的組別出現(xiàn)明顯紅色熒光,，表明該組具有強抗菌效應(yīng),，此結(jié)果與前述抗菌實驗結(jié)果一致。為進一步驗證抗菌效果,，利用掃描電鏡(SEM)觀察不同處理后金黃色葡萄球菌的形態(tài)變化,。圖3B顯示：對照組與單純808 nm激光照射組的菌體表面光滑、細(xì)胞膜完整無損,；而Van-CuInSe?/ZnS量子點+808 nm激光聯(lián)合處理組出現(xiàn)明顯的細(xì)胞膜形變,，印證了該協(xié)同體系的強抗菌能力。有趣的是,，SEM圖像中可見量子點附著在金黃色葡萄球菌周圍,，表明Van-CuInSe?/ZnS量子點對金黃色葡萄球菌具有良好的靶向能力。

圖4. Van-CuInSe2/ZnS QDs體內(nèi)腫瘤成像實驗

為研究Van-CuInSe2/ZnS量子點的體內(nèi)成像潛力,，將小鼠背部皮下感染25 μL金黃色葡萄球菌于彼此遠離的四個位點,，菌濃度分別為0 CFU/mL、1 × 10^3 CFU/mL、1 × 10^7 CFU/mL,、1 × 10^11 CFU/mL,。隨后，在同四個位點皮下注射25 μL Van-CuInSe2/ZnS量子點,。之后,，在不同時間點記錄NIR-II熒光圖像。金黃色葡萄球菌感染高效監(jiān)測的示意圖如圖4A所示,。如圖4B和C所示,，注射Van-CuInSe2/ZnS量子點的小鼠在感染區(qū)域和對照組顯示出更高的熒光信號。在感染0 CFU/mL,、1 × 10^3 CFU/mL,、1 × 10^7 CFU/mL的位點顯示出相對簡單的光致發(fā)光強度趨勢，而在感染10^11 CFU/mL金黃色葡萄球菌的位點呈現(xiàn)波動模式,；感染位點Van-CuInSe2/ZnS量子點標(biāo)記的金黃色葡萄球菌的光致發(fā)光強度變化模式證明了體內(nèi)金黃色葡萄球菌負(fù)荷的實時監(jiān)測,，這反過來反映了金黃色葡萄球菌感染的發(fā)展過程：金黃色葡萄球菌感染發(fā)生后，入侵的金黃色葡萄球菌會首先受到先天免疫系統(tǒng)的攻擊,，導(dǎo)致細(xì)菌負(fù)荷降至清除,，因此，在1 × 10^3 CFU/mL和1 × 10^7 CFU/mL位點,，光致發(fā)光強度隨時間開始下降,。然而，在1 × 10^11 CFU/mL位點,，Van-CuInSe2/ZnS量子點標(biāo)記金黃色葡萄球菌的光致發(fā)光強度起初注射后呈現(xiàn)增加,，這表明量子點的聚集是由靶向作用引起的。隨后,，光致發(fā)光強度下降至谷底,，這反映了由于免疫反應(yīng)導(dǎo)致的細(xì)菌數(shù)量減少。隨后,，熒光信號增加,，這反映了在免疫反應(yīng)間歇期由于增殖導(dǎo)致的細(xì)菌數(shù)量激增。最終,，熒光信號隨時間下降,，表明從感染中自我康復(fù)。

圖5.（A）小鼠皮下感染金黃色葡萄球菌模型構(gòu)建及治療過程示意圖（4h）,；（B）金黃色葡萄球菌感染小鼠在不同時間段以不同方式處理的數(shù)碼照片,；（C）不同處理后注射Van-CuInSe2/ZnS量子點的小鼠的NIR II成像

受到Van-CuInSe2/ZnS量子點優(yōu)異的體外抗菌效果和令人滿意的體內(nèi)生物相容性鼓舞。Van-CuInSe2/ZnS量子點在體內(nèi)抗菌治療中的潛在應(yīng)用通過金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的皮膚感染模型進行了評估,。具體而言,，在小鼠背部皮下注射1 × 10^9 CFU/mL的金黃色葡萄球菌導(dǎo)致皮下膿腫形成,，隨后在注射后4小時進行不同處理。圖5A展示了高效消除金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)皮膚感染模型的實驗方案,。如圖5B所示,，在對照組、808 nm組和Van-CuInSe2/ZnS量子點組中,，皮下注射金黃色葡萄球菌第二天后,，膿皰從皮膚內(nèi)部出現(xiàn)；隨后,，感染區(qū)域出現(xiàn)潰瘍,，在第六天仍出現(xiàn)大面積傷口。對照組傷口面積最大,，而Van-CuInSe2/ZnS量子點組觀察到輕微傷口,。相比之下，及時使用Van-CuInSe2/ZnS量子點+808 nm治療的感染區(qū)域沒有出現(xiàn)膿皰,。此外,，注射Van-CuInSe2/ZnS量子點的小鼠在808 nm光照下膿腫區(qū)域顯示熒光。在Van-CuInSe2/ZnS量子點組中,，熒光信號在第四天仍然出現(xiàn)；然而,，在Van-CuInSe2/ZnS量子點+808 nm組進行光熱治療后,，炎癥逐漸愈合，熒光減少,，在第四天幾乎觀察不到,，如圖5C所示。當(dāng)Van-CuInSe2/ZnS量子點+808 nm用于治療12小時感染金黃色葡萄球菌的小鼠時,，也獲得了類似的抗菌效果,。這些結(jié)果表明Van-CuInSe2/ZnS量子點在808 nm激光照射下在體內(nèi)具有優(yōu)異的抗感染治療效果。

圖6. Van-CuInSe2/ZnS量子點治療細(xì)菌性傷口感染（A）小鼠細(xì)菌性傷口感染的紅外熱像圖,；（B）第0天至第13天小鼠傷口的數(shù)碼照片,；（C）分別在第1天和第13天在傷口中的金黃色葡萄球菌菌落板

此外，還采用金黃色葡萄球菌感染的小鼠皮膚傷口模型評估治療效果,。首先評價了Van-CuInSe?/ZnS量子點的光熱性能：如圖6A所示,，在近紅外光照射下，含量子點實驗組的傷口區(qū)域溫度在5分鐘內(nèi)急速升至51.6°C,，證實該量子點可實現(xiàn)體內(nèi)高效光熱治療,。隨后構(gòu)建金黃色葡萄球菌感染的皮膚創(chuàng)傷模型進行療效研究，圖6B顯示不同處理組在第0,、1,、3、5、7,、9,、11和13天的創(chuàng)面照片。Van-CuInSe?/ZnS量子點+808nm激光組的創(chuàng)面愈合優(yōu)于其他組,，表明該量子點在808nm激光照射下具備抗菌性能,。為驗證治療效果，分別在第1天和第13天采集創(chuàng)面分泌物進行瓊脂平板活菌定量,。如圖6C所示,，量子點+近紅外組的菌落數(shù)量最少，顯著低于其余三組,。上述結(jié)果證明：經(jīng)808nm激光激發(fā)的Van-CuInSe?/ZnS量子點能有效對抗金黃色葡萄球菌感染,。在實驗過程中，由于正常生長,，各組小鼠的體重呈現(xiàn)類似的增加趨勢,，表明Van-CuInSe2/ZnS量子點和808 nm光照對小鼠沒有明顯的副作用。

參考文獻

Geng H, Wang C, Dong Y, et al. In vivo dynamic monitoring and photothermal therapy of bacterial infection by NIR-II CuInSe2 quantum dots[J]. Chemical Engineering Journal, 2025, 508: 160924.

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動物活體熒光成像系統(tǒng) - MARS 

In Vivo Imaging System

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 恒光智影

上海恒光智影醫(yī)療科技有限公司,，被評為“國家高新技術(shù)企業(yè)”，“上海市專精特新中小企業(yè)”,，榮獲“科技部重大儀器專項立項項目”,，上海市“科技創(chuàng)新行動計劃”科學(xué)儀器領(lǐng)域立項單位。

恒光智影,，致力于為生物醫(yī)學(xué),、臨床前和臨床應(yīng)用等相關(guān)領(lǐng)域的研究提供先進的,、一體化的成像解決方案。

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