在這些恒溫擴增技術中，以2000年shou次報道的LAMP法尤為耀眼和引人關注,，目前占據超過60%的恒溫檢測市場,。核酸檢測對LAMP技術如此親賴，究其原因,，得益于其它恒溫檢測技術難以達到LAMP技術的綜合性優(yōu)勢：

1,、反應速度極快，優(yōu)化的引物組合可以達到15min內檢測到單copy分子,，檢測速度接近或超過RPA和NASBA,；

能夠達到超敏檢測極限，1-5copy的分子能夠穩(wěn)定檢出,，穩(wěn)定性高,，其它任何恒溫技術難以達到如此穩(wěn)定的水平；

2,、結果判讀形式的多樣化,，適應各種環(huán)境和條件下的核酸快速檢測。LAMP擴增作為終點判讀形式,，可不借助任何其它輔助設備,，裸眼觀察檢出結果?；阝}黃綠素,、HNB、紅黃變色,、OG橙綠變色都可以肉眼觀察結果,。LAMP同樣可借助濁度儀進行實時濁度分析。在反應體系中加入SYBR Green熒光染料后,，可使用小型恒溫熒光儀進行實時檢測,。以上這些結果判讀形式均可在野外等非標準實驗室進行，所需設備簡單,、小巧,、價格低廉,、便于普及。除此外,，傳統(tǒng)實驗室中的熒光定量PCR儀,，同樣可進行LAMP檢測，可采用SYBR Green,、MB探針法或LAMP TaqMan探針法,，對于經常操作PCR檢測的人員來講，可以無縫對接,、無需更換設備,。

3、對RNA病毒的漏檢率低,，由于RNA病毒的突變率較高,，在PCR檢測中個別突變對PCR的擴增影響較大，容易造成病毒漏檢的假陰性,。而LAMP識別靶基因8個區(qū)段,，在這些識別區(qū)段中個別的突變對LAMP擴增影響較小，不易產生漏檢,。

4,、試劑穩(wěn)定、易于使用,。同RPA,、NASBA等技術相比，LAMP與PCR法都采用單一酶（或雙酶）系統(tǒng)進行反應,，生產批次穩(wěn)定,、反應酶系統(tǒng)耐高溫，試劑穩(wěn)定性好,。在檢測試劑中僅包含酶mix一管、引物/探針一管,，使用方便,，在熒光定量PCR機器上可方便的進行高通量檢測。而RPA,、NASBA等系統(tǒng)需要多個復合酶,，比例嚴謹、試劑穩(wěn)定生產困難,、保存運輸條件苛刻,、難以高通量應用。

5,、LAMP法對耐受雜質能力強,。PCR,、RPA、NASBA等擴增體系均需要進行核酸純化制備,，在進行粗制品的直擴系統(tǒng)中,，上樣量均較小（<10%）,，無法大體積上樣,，雜質對這些擴增方法均影響較大。而LAMP法對大多數樣本的耐受性能達到20%以上,，個別樣本的含量可以容忍到50%以上,，如此大的上樣體積量，決定了LAMP具有更高的檢出率,。

6,、擴增反應同步病毒滅活，由于LAMP反應溫度在65℃的高溫條件下進行,，在病毒液直擴中,，反應過程中即可滅活病毒，降低耗材的污染風險,。

7,、高特異性，隨著LAMP用酶不斷改進,、反應緩沖液的不斷優(yōu)化,、探針技術的搭配、引物設計理念的不斷改善,，LAMP的非特異性擴增獲得質的提升,，目前在優(yōu)化的LAMP體系中，假陽性的情況已經得到改善,，假陽性比例接近甚至低于PCR方法,。

8、多重熒光探針的應用,。隨著Bst DNA聚合酶和反應緩沖體系的不斷改進,、LAMP TaqMan技術的發(fā)明，多重LAMP體系得以建立,。這種多重的LAMP技術,，達到了金標準TaqMan PCR的多靶基因、內參質控樣本的相同性能,，符合到臨床應用的標準,。

恒溫擴增技術的發(fā)展現狀

自1980年PCR技術發(fā)明后，基于PCR技術的核酸檢測迅速應用到臨床,、食品,、環(huán)境的檢測中,，并成為核酸檢測的金標準。但PCR的檢測技術存在設備體積大,、粗樣品耐受性差,、反應時間長、靈敏度難以達到單copy等諸多缺點,，已經難以滿足現代核酸檢測的要求：速度快（<30min）,、超靈敏度（1-5copy/test）、大體積粗制樣品直檢（20-50%反應體積樣本量）,、野外操作,、簡單化操作等方面的指標。 在過去的20年中科學家一直嘗試通過恒溫擴增的方法來實現上述目標,，這其中包括RCA(rolling circle amplification),、LAMP(loop-mediated isothermal amplification)、RPA(recombinase polymerase amplification),、NASBA(nucleic acid sequence based amplification),、SDA(strand displacement amplification)、HDA (helicase dependent amplification),、TMA(transcription-mediated amplification)等新型核酸恒溫擴增技術,。