Towbin 緩沖液：經(jīng)典的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印緩沖液,，由 Tris、甘氨酸和甲醇組成,。Tris 和甘氨酸維持緩沖體系的 pH 穩(wěn)定,，甲醇能降低凝膠的孔徑，防止蛋白質(zhì)在轉(zhuǎn)印過程中擴散,，有助于蛋白質(zhì)從凝膠向膜上轉(zhuǎn)移,。常用于半干轉(zhuǎn)印和濕轉(zhuǎn)印，適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)印,，但甲醇對某些蛋白質(zhì)的活性可能有影響 ,。

CAPS 緩沖液：主要成分是 3 - 環(huán)己胺 - 1 - 丙磺酸（CAPS）和甲醇，pH 一般調(diào)節(jié)至 10.5 左右,。相比 Towbin 緩沖液,，CAPS 緩沖液更適合堿性條件下對蛋白質(zhì)活性要求較高的轉(zhuǎn)印，尤其適用于高分子量蛋白質(zhì)和糖蛋白的轉(zhuǎn)印，能較好地保持蛋白質(zhì)的生物活性 ,。

Pierce 1 - Step Transfer Buffer（Thermo Scientific）：可用于從聚丙烯酰胺凝膠（SDS - PAGE）到硝酸纖維素或 PVDF 膜的快速半干轉(zhuǎn)印,，適用于分子量在 10 - 300kDa 的蛋白質(zhì)。該緩沖液使用方便,，能有效促進蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移,，簡化轉(zhuǎn)印流程,，節(jié)省實驗時間 ,。

硝酸纖維素膜（NC 膜）：蛋白質(zhì)結(jié)合能力強，非特異性吸附低,，能與蛋白質(zhì)通過疏水作用和離子鍵結(jié)合,。其優(yōu)點是價格相對較低，檢測信號清晰,，適用于多種檢測方法,，如化學(xué)發(fā)光法、顯色法等,。但機械強度較差,，易脆裂，操作時需小心,，且在潮濕環(huán)境中容易變形 ,。

聚偏二氟乙烯膜（PVDF 膜）：具有較高的蛋白質(zhì)結(jié)合能力和化學(xué)穩(wěn)定性，機械強度好,，不易破損,，便于操作和后續(xù)處理，如多次重復(fù)檢測,。疏水性強,，使用前需用甲醇等有機溶劑進行預(yù)處理以活化膜表面，增強蛋白質(zhì)結(jié)合力,，常用于 Western Blot 等對蛋白質(zhì)檢測要求較高的實驗 ,。

尼龍膜：機械強度高，耐磨損,，能耐受較劇烈的實驗條件,。與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力較強，適用于核酸和蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)印,。但尼龍膜的非特異性吸附相對較高,，在使用時需要進行封閉處理以降低背景信號 。

脫脂奶粉：常用的封閉劑之一,，主要成分是酪蛋白,，價格便宜，能有效封閉膜上的非特異性結(jié)合位點，降低背景信號,。但由于含有少量生物素和堿性磷酸酶,，在使用生物素 - 親和素系統(tǒng)或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗進行檢測時，可能會產(chǎn)生非特異性信號 ,。

牛血清白蛋白（BSA）：是一種純度較高的封閉試劑,，非特異性結(jié)合低，適用于各種檢測系統(tǒng),，尤其在對背景要求嚴格的實驗中表現(xiàn)良好,。不過價格相對脫脂奶粉較高，對于大規(guī)模實驗可能成本較高 ,。

Blocking One Solution（Nacalai Tesque）：一種現(xiàn)成的封閉溶液,，使用方便，封閉效果好,，能有效減少非特異性背景,，可用于多種免疫檢測實驗，節(jié)省實驗準(zhǔn)備時間 ,。

DAB（3,3'- 二氨基聯(lián)苯胺）：經(jīng)典的顯色底物,，與 HRP 反應(yīng)后產(chǎn)生棕色沉淀，顯色結(jié)果直觀,，便于觀察和拍照記錄,。但 DAB 具有一定的毒性，使用時需注意防護 ,。

NBT/BCIP（硝基藍四唑 / 5 - 溴 - 4 - 氯 - 3 - 吲哚磷酸）：常用于堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的二抗檢測,，反應(yīng)后產(chǎn)生藍紫色沉淀，靈敏度較高,，適用于多種膜材料 ,。

Amersham ECL Start Western Blotting Detection Reagent（Cytiva）：基于魯米諾的化學(xué)發(fā)光底物，靈敏度高,，適用于常規(guī)和驗證性 Western Blotting 實驗,。與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗結(jié)合后，在化學(xué)反應(yīng)中產(chǎn)生光信號,，通過曝光顯影呈現(xiàn)蛋白質(zhì)條帶 ,。

SuperSignal West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate（Thermo Scientific）：具有超高靈敏度，能夠檢測到低豐度蛋白質(zhì),，適用于需要檢測微量蛋白質(zhì)的實驗,。發(fā)光信號強且穩(wěn)定，可延長曝光時間以獲取更清晰的條帶 ,。

化學(xué)發(fā)光底物：

顯色底物：

一抗：特異性識別目標(biāo)蛋白質(zhì)的抗體,，根據(jù)來源可分為鼠源、兔源、羊源等,；根據(jù)制備方法可分為多克隆抗體和單克隆抗體,。多克隆抗體能識別多個抗原表位，靈敏度較高,，但特異性可能相對較低,；單克隆抗體特異性強，識別單一抗原表位,，但可能存在親和力較低的問題 ,。

二抗：與一抗結(jié)合的抗體，通常標(biāo)記有酶（如 HRP,、AP）或熒光基團,。通過與一抗結(jié)合,，二抗可將標(biāo)記物引入檢測體系,，實現(xiàn)對目標(biāo)蛋白質(zhì)的檢測。標(biāo)記有酶的二抗配合相應(yīng)的底物進行顯色或化學(xué)發(fā)光檢測,，標(biāo)記有熒光基團的二抗則可通過熒光顯微鏡等設(shè)備進行觀察和分析 ,。