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48道基因合成儀誤差來源及分析

來源：蘇州守真儀器設(shè)備有限公司 2025年06月18日 17:47

　　一、48道基因合成儀設(shè)備相關(guān)誤差：

　　1. 加樣系統(tǒng)誤差

　　移液精度波動：

　　不同通道的移液泵或閥可能存在差異,，導(dǎo)致加樣量不一致（如堿基單體分配不均）,。

　　長期使用后，移液部件磨損或堵塞,，造成體積偏差,。

　　交叉污染：

　　通道之間密封性不足，導(dǎo)致液體殘留或揮發(fā)物擴散,，引起堿基或酶污染,。

　　2. 溫度控制誤差

　　反應(yīng)體系溫差：

　　48通道加熱模塊的溫度均勻性不足，部分孔位溫度偏高或偏低,，影響延伸效率,。

　　升溫/降溫速率不一致，導(dǎo)致PCR或連接反應(yīng)不同步,。

　　熱蓋壓力不均：

　　熱蓋與反應(yīng)板接觸不緊密,，部分孔蒸發(fā)嚴(yán)重，改變反應(yīng)體系體積,。

　　3. 檢測系統(tǒng)誤差

　　熒光/吸光度檢測偏差：

　　不同通道的光學(xué)檢測器靈敏度差異,，導(dǎo)致對合成效率的判斷失誤。

　　背景噪聲干擾（如熒光淬滅或散射）,，影響實時監(jiān)測準(zhǔn)確性,。

　　4. 機械故障

　　磁珠分離或振蕩混勻不均：

　　磁力模塊磁場強度差異，導(dǎo)致磁珠回收效率不同,，影響洗滌或純化效果,。

　　振蕩頻率或時間不一致，導(dǎo)致反應(yīng)混合不充分,。

　　二,、48道基因合成儀的操作與流程誤差：

　　1. 程序設(shè)置錯誤

　　參數(shù)輸入偏差：

　　合成周期（如延伸時間,、變性溫度）設(shè)置不當(dāng)，導(dǎo)致片段長度或錯配率升高,。

　　未根據(jù)模板類型（如GC含量高,、二級結(jié)構(gòu)）調(diào)整參數(shù)。

　　自動化腳本漏洞：

　　多步驟程序（如切割,、連接,、純化）銜接不當(dāng)，導(dǎo)致反應(yīng)中斷或過度處理,。

　　2. 樣本加載問題

　　加樣順序或位置錯誤：

　　人工加樣時未按規(guī)范操作（如未更換槍頭）,，引入外源DNA污染。

　　不同通道的起始物料量差異（如引物濃度不同）,，導(dǎo)致合成效率不均,。

　　3. 純化與回收效率低

　　磁珠或硅膠膜純化損失：

　　純化過程中小片段DNA（如短寡核苷酸）吸附損失，降低產(chǎn)量,。

　　洗滌不徹*,，殘留鹽或雜質(zhì)抑制后續(xù)反應(yīng)。

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