CCK-8 細胞活力檢測試劑盒技術(shù)詳解

來源：上海易匯生物科技有限公司 2025年06月18日 16:05

CCK-8 細胞活力檢測試劑盒技術(shù)文章

（一）產(chǎn)品概述

CCK-8（Cell Counting Kit-8）細胞活力檢測試劑盒是一種基于 WST-8（水溶性四唑鹽）的高靈敏度、便捷的細胞活力檢測工具。試劑盒主要包含 CCK-8 溶液、細胞培養(yǎng)基,、陽性對照品等組分。其中,，CCK-8 溶液是核心試劑,，WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，可被細胞內(nèi)的脫氫酶還原為水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物,，該產(chǎn)物的生成量與活細胞數(shù)量成正比,，通過測定其在特定波長下的吸光度，即可準確反映細胞活力,。

（二）技術(shù)原理

CCK-8 檢測的原理基于細胞內(nèi)脫氫酶的活性,。當 CCK-8 溶液加入到含有細胞的培養(yǎng)體系中時，WST-8 可穿透細胞膜進入細胞內(nèi),?；罴毎械木€粒體脫氫酶能夠?qū)?WST-8 還原為橙黃色的甲臜,，而死細胞由于缺乏活性的脫氫酶，無法進行該還原反應,。在 450nm 波長處測定甲臜產(chǎn)物的吸光度，其吸光度值與活細胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系,。通過建立標準曲線,，即可根據(jù)吸光度值準確計算出細胞活力和細胞數(shù)量。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比,，CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好,，無需裂解細胞，避免了操作過程中因細胞裂解不等因素導致的誤差,，使檢測結(jié)果更加準確,、穩(wěn)定。

（三）應用領(lǐng)域與實際案例

藥物研發(fā)：在新藥篩選和藥物毒性評估中,，CCK-8 細胞活力檢測試劑盒被廣泛應用,。例如，在抗腫瘤藥物研發(fā)過程中,，科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細胞系,，一定時間后加入 CCK-8 溶液檢測細胞活力。通過計算藥物對細胞的半數(shù)抑制濃度（IC50）,，評估藥物的抗腫瘤活性和毒性,，為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持，篩選出具有潛力的候選藥物,。

細胞生物學研究：在細胞增殖,、分化、凋亡等基礎(chǔ)細胞生物學研究中,，該試劑盒用于實時監(jiān)測細胞狀態(tài),。如在干細胞分化研究中，使用 CCK-8 檢測不同誘導條件下干細胞的活力變化,，判斷細胞是否成功分化以及分化過程中細胞活力的動態(tài)變化,，為揭示細胞分化機制提供依據(jù) 。

毒理學研究：在評估化學物質(zhì),、環(huán)境污染物等對細胞的毒性作用時,，CCK-8 法是常用的檢測手段。例如,，檢測重金屬離子對肝細胞的毒性,，將肝細胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中，利用 CCK-8 試劑盒檢測細胞活力,，確定重金屬的毒性劑量和作用機制,，為環(huán)境安全評估和毒理學研究提供數(shù)據(jù),。

（四）使用方法與注意事項

使用方法

細胞接種：將對數(shù)生長期的細胞消化后，用培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度,，接種到 96 孔板中,，每孔加入適量細胞懸液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

藥物處理（如需）：根據(jù)實驗目的,，向孔中加入不同濃度的藥物或處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間,。

CCK-8 檢測：向每孔加入適量 CCK-8 溶液,，輕輕混勻后，將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時（具體時間根據(jù)細胞類型和實驗條件確定）,。

吸光度測定：使用酶標儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值,，根據(jù)標準曲線計算細胞活力和細胞數(shù)量。

注意事項

試劑儲存：CCK-8 試劑盒應避光保存于 4℃冰箱,，避免反復凍融,，否則會影響試劑活性。

操作規(guī)范：實驗過程中應嚴格遵守無菌操作原則,，避免污染,。加入 CCK-8 溶液時，避免產(chǎn)生氣泡,，以免影響吸光度測定,。

干擾因素：某些具有還原性的物質(zhì)可能會與 WST-8 發(fā)生反應，影響檢測結(jié)果,，實驗前需評估樣品中是否存在此類干擾物質(zhì),，并進行相應處理。

對照設(shè)置：實驗中應設(shè)置空白對照（只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液）,、陰性對照（正常培養(yǎng)的細胞）和陽性對照（已知具有細胞毒性或促進細胞生長作用的物質(zhì)處理的細胞）,，確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。

CCK-8 細胞活力檢測試劑盒憑借其操作簡便,、靈敏度高,、結(jié)果準確等優(yōu)勢，在生物技術(shù)多個領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用,。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,，其應用場景將進一步拓展，同時也將推動相關(guān)技術(shù)的持續(xù)創(chuàng)新和優(yōu)化 ,。

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