昆蟲細胞培養(yǎng)基CW003使用詳細介紹參考

產品描述

CW003培養(yǎng)基適用于sf9,、High Five等昆蟲細胞懸浮培養(yǎng)和瞬時表達，含有細胞生長的全

部營養(yǎng)成分,，無需添加物即可使用,。

產品特點

?產品不含血清

?即用型培養(yǎng)基，無需添加額外成分

?支持sf9,、High Five等昆蟲細胞的懸浮培養(yǎng)馴化與高密度培養(yǎng)

?支持桿狀病毒載體表達系統生產重組基因蛋白

基礎參數

產品使用方法

細胞馴化與傳代

1） 培養(yǎng)條件

溫度：27oC,；搖床轉速：110-130 rpm；傳代細胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL,。

2） 直接馴化

大部分情況下,，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的sf9、High Five細胞,，可以直接適應至CW003培養(yǎng)

基,，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

3） 漸進式馴化

注意：選用低代次,、處于對數的細胞進行馴化,。

①在原培養(yǎng)基中復蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定，使用原培養(yǎng)基

+CW003培養(yǎng)基（CW003比例從25%至90%）逐漸馴化,，傳代細胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL,，每48h進行傳代。

②待細胞在含90%以上CW003培養(yǎng)基生長正常后,，可嘗試將細胞傳代至100% CW003培養(yǎng)基

中,，并連續(xù)傳代3-4次，如細胞保持穩(wěn)定生長,，即已適應至CW003培養(yǎng)基,。

細胞復蘇

1） 迅速取出凍存的細胞，在37℃水浴條件下進行快速解凍（可以在水中輕輕晃動,，時間控制

在120s以內）,，至凍存管內剩余小塊冰晶。

2） 在生物安全柜中,，將融化的細胞全部轉移至無菌離心管中,，加入10 mL預熱至37℃的培養(yǎng)

基，離心換液（175 g,，5 min）去除全部上清,，加入20-30mL預熱至37℃新鮮培養(yǎng)基重懸，后

轉移至搖瓶培養(yǎng)。

細胞凍存

1） 凍存細胞時,，要選擇處于對數,、狀態(tài)良好，活力≥98%的的細胞,；

2） 事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養(yǎng)基的體積,，凍存密度為2.5-3.5×107（通常凍存

濃度為1.0-2.0×107）cells/ml/支；

3） 細胞凍存液配制：

45%新鮮培養(yǎng)基+45%原培養(yǎng)基（上清）+10%DMSO,，充分混勻,，存放于4℃，一般為當

天用當天制備,；

4） 以175 g,，5 min的條件離心收集細胞，棄上清,，用凍存培養(yǎng)基（

4℃ ）重懸細胞,；

5） 將重懸的細胞液迅速分裝細胞到無菌的凍存管中，每支1ml,，并貼好標簽,；

6） 將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒（注意填充異丙醇，4℃預冷）中,，置于-80℃ 冰箱(每

分鐘下降1℃),，過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。