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人S100A12蛋白(S100A12)ELISA試劑盒

來源:上海索寶生物科技有限公司   2012年08月09日 09:04  

 S100A12蛋白(S100A12)ELISA試劑盒

 用于血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)

 

原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗人 S100A12 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 S100A12與單抗結(jié)合,,加入生物素化的抗人S100A12,,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,,加入底物工作液顯藍色,,后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,,S100A12濃度與OD值成正比,,可通過繪制標準曲線求出標本中S100A12濃度。

試劑盒組成2-8保存)

 

酶標板(Coated Wells

96

酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標準品(Standards):8ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

*抗體工作液(Biotinylated Antibody

12ml

終止液Stop Solution

12ml

 

準備試劑與收集血樣

1.          收集標本:血清,、血漿(EDTA,、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測,,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 -70 )保存,,避免反復(fù)凍融,。

2.          標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成8000pg/ml的溶液,。設(shè)標準管8管,,每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入8000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,,移至第二管,。如此反復(fù)作對倍稀釋,,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照,。

3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水),。

4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

檢測程序

1.          加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37120分鐘,。

2.          洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,,向濾紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板充分混勻后置3760分鐘,。

4.          洗板:同前。

5.          每孔加酶標抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板置3730分鐘,。

6.          洗板:同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul,,置37 暗處反應(yīng)15分鐘,。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值,。

結(jié)果計算與判斷

1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算,。

2.          以標準品40002000,、1000,、500250,、12562.5,、0 pg/ml為橫坐標,,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,,畫出標準曲線,。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)S100A12含量。

試劑盒性能

             1.   靈敏度小的S100A12 檢測濃度小于30pg/ml,。

2.        特異性:可同時檢測重組或天然的人S100A12 ,。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。

3.        重復(fù)性:板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于10%,。

注意事項

             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線,。

 2.   洗滌過程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯誤地升高,。

             3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥,。

             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。

 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷,!

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