人S100A12蛋白(S100A12)ELISA試劑盒
(用于血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗人 S100A12 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 S100A12與單抗結(jié)合,,加入生物素化的抗人S100A12,,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,,加入底物工作液顯藍色,,后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,,S100A12濃度與OD值成正比,,可通過繪制標準曲線求出標本中S100A12濃度。
試劑盒組成(2
酶標板(Coated Wells) | 96孔 | 酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×標本稀釋液(Sample Buffer) | 12ml | 20×濃縮洗滌液(Wash Buffer) | 50ml |
標準品(Standards):8ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
*抗體工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 終止液(Stop Solution) | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本:血清,、血漿(EDTA,、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測,,2
2. 標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成8000pg/ml的溶液,。設(shè)標準管8管,,每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入8000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,,移至第二管,。如此反復(fù)作對倍稀釋,,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照,。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水),。
4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測程序
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板充分混勻后置
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板置
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,,置
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值,。
結(jié)果計算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算,。
2. 以標準品4000、2000,、1000,、500、250,、125、62.5,、0 pg/ml為橫坐標,,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,,畫出標準曲線,。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)S100A12含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度:小的S
2. 特異性:可同時檢測重組或天然的人S100A12 ,。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于10%,。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線,。
2. 洗滌過程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯誤地升高,。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥,。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷,!
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