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一、全自動(dòng)多肽合成儀設(shè)備校準(zhǔn)與準(zhǔn)備
安裝與調(diào)試
由專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行設(shè)備的安裝和調(diào)試,，確保設(shè)備能夠正確運(yùn)行,。
檢查溶劑儲(chǔ)液瓶與氣體管道是否連接好，儀器各部分是否完好,。
打開合成儀電源開關(guān)及壓縮空氣開關(guān),，檢查壓力是否符合范圍(如“AIR”表壓力大于60psi而小于100psi；“N2”表壓力大于5psi而小于10psi),。
校準(zhǔn)與測(cè)試
根據(jù)制造商的說明書進(jìn)行設(shè)備的校準(zhǔn)和測(cè)試,，確保所有系統(tǒng)(如泵、閥,、檢測(cè)器等)都運(yùn)行正常,。
進(jìn)行溫度、條形碼,、反應(yīng)器混合攪拌,、取液針、氨基酸推瓶的測(cè)試,；電磁閥測(cè)試,；化學(xué)試劑瓶和氨基酸瓶的流量校準(zhǔn)；UV控制校準(zhǔn),。
選擇合適的反應(yīng)容器
根據(jù)合成規(guī)模選擇合適的反應(yīng)容器,，并確保容器的材料不會(huì)與反應(yīng)物或溶劑發(fā)生反應(yīng)。
二,、試劑與材料準(zhǔn)備
試劑準(zhǔn)備
準(zhǔn)備合成用的氨基酸,、活化試劑、溶劑等，確保所有材料都是新鮮且純凈的,，以避免雜質(zhì)的引入,。
根據(jù)合成方案，按照所需的物質(zhì)比例進(jìn)行稱量,，確保準(zhǔn)確性,。
將試劑依次裝入各貼有相應(yīng)標(biāo)簽的儲(chǔ)液瓶?jī)?nèi)。
樹脂準(zhǔn)備
將樹脂加入固相合成儀中,，用適當(dāng)?shù)娜軇?如DCM)溶脹樹脂,，然后抽干。
使用DMF等溶劑洗滌樹脂,，以去除雜質(zhì),，洗滌結(jié)束后抽干備用。
三,、合成操作
設(shè)置反應(yīng)條件
根據(jù)所需多肽的序列和長(zhǎng)度設(shè)定合適的反應(yīng)條件,，包括溫度、壓力,、時(shí)間等。
脫保護(hù)
去除前一個(gè)氨基酸的保護(hù)基團(tuán),，使其能夠與下一個(gè)氨基酸發(fā)生反應(yīng),。
例如，使用40%三氟乙酸/二氯甲烷溶液脫保護(hù),，之后用二氯甲烷,、甲醇等洗滌。
偶聯(lián)
將新的氨基酸與已脫保護(hù)的氨基酸結(jié)合,，形成肽鍵,。
將第一個(gè)氨基酸(通常從C端開始)用一定體積的DMF溶解，并加入縮合劑(如DCC,、HBTU等)進(jìn)行活化,。
將活化后的氨基酸溶液投入固相合成儀中，補(bǔ)充DMF至適當(dāng)反應(yīng)濃度,，攪拌進(jìn)行縮合反應(yīng),。
洗滌
清洗掉未反應(yīng)的物質(zhì)和副產(chǎn)物，確保反應(yīng)的純度,。
每完成一步合成后,，都需要通過洗滌來清除反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)品和未反應(yīng)的原料，減少雜質(zhì)的積累,。
重復(fù)步驟
重復(fù)脫保護(hù)和偶聯(lián)步驟,，直到多肽鏈達(dá)到預(yù)定長(zhǎng)度。
四、產(chǎn)物切割與提純
樹脂裂解
配置裂解液(通常包含TFA等強(qiáng)酸),，并提前置冰柜中冷藏保存,。
將肽樹脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液,，攪拌反應(yīng)以將多肽從樹脂上裂解下來,。
裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹脂并以TFA等溶劑洗滌,。
多肽純化
將裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中室溫濃縮至小體積,。
使用適當(dāng)?shù)某恋韯?如甲基叔丁基醚)使多肽析出，并通過離心,、洗滌等步驟得到粗肽,。
使用高效液相色譜(HPLC)等方法對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以去除雜質(zhì)并分離出目標(biāo)多肽,。
濃縮,、過濾與凍干
將純化后的多肽溶液旋蒸除去有機(jī)溶劑，得到濃縮的多肽溶液,。
對(duì)濃縮后的多肽溶液進(jìn)行無菌過濾,。
將過濾后的多肽溶液置于凍干機(jī)中，設(shè)定適當(dāng)?shù)纳郎爻绦蜻M(jìn)行凍干處理,。
五,、質(zhì)量控制與記錄
監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程
使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法(如紫外檢測(cè)、質(zhì)譜分析等)監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程,，確保每一步的反應(yīng)都按預(yù)期進(jìn)行,。
記錄與報(bào)告
詳細(xì)記錄每一步的操作參數(shù)和結(jié)果，包括試劑使用量,、反應(yīng)時(shí)間,、溫度、壓力等,。
生成實(shí)驗(yàn)報(bào)告,，總結(jié)合成過程中的關(guān)鍵數(shù)據(jù)和產(chǎn)物純度等信息。
相關(guān)產(chǎn)品
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