間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含酚紅）

貨號(hào)：B01096

規(guī)格：500mL 

產(chǎn)品概述

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基是根據(jù)UltraGRO™-Advanced添加劑適配的一款化學(xué)成分明確,、無(wú)異種動(dòng)物源成分的培養(yǎng)基。各種營(yíng)養(yǎng)成分相互搭配特別適合用于人間充質(zhì)干細(xì)胞（包括臍帶,，脂肪,，骨髓等來(lái)源）的無(wú)血清條件下原代分離及傳代培養(yǎng)，具備保持間充質(zhì)干細(xì)胞的多項(xiàng)分化潛能及維持其良好的增殖速率的特性,。

產(chǎn)品特點(diǎn)

?無(wú)動(dòng)物源,、無(wú)蛋白、wan全化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基

?適應(yīng)多種人間充質(zhì)干細(xì)胞,，包括臍帶,，脂肪，骨髓等來(lái)源

?GMP生產(chǎn),，全進(jìn)口原料,，批間差異小

?無(wú)需包被培養(yǎng)板，可用于原代細(xì)胞分離及傳代

?經(jīng)過(guò)低內(nèi)毒素和微生物檢測(cè)

產(chǎn)品詳情

使用說(shuō)明

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）wan全培養(yǎng)基配制

將UltraGRO™-Advanced添加劑（貨號(hào)HPCFDCRL50）在37℃水浴wan全融化,，按體積1:19加入到間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,，輕輕混合均勻,，即為間充質(zhì)干細(xì)胞wan全培養(yǎng)基。

注：原代分離推薦使用青霉素-鏈霉素溶液（貨號(hào)B03002）,，其他代次不推薦使用,。

原代間充質(zhì)干細(xì)胞分離

1、 手術(shù)臺(tái)上取正常剖宮產(chǎn)健康新生兒臍帶,，浸泡于含青霉素-鏈霉素溶液的wan全培養(yǎng)基中,，4℃保存。

2,、超凈臺(tái)內(nèi)取出臍帶,，用DPBS（貨號(hào)B02001）洗去臍帶殘留血液，剪成3-4cm小段,。

3,、用DPBS清洗一次,，用組織鑷去除臍帶中的2條臍動(dòng)脈,。

4、 沿臍靜脈將臍帶剪開(kāi),，用組織鑷刮去靜脈,，留下華通氏膠（Whalton’s Jelly）。

5,、 將已除去臍動(dòng)靜脈的臍帶,，放入DPBS中清洗2-3次，剪成1.5mm左右大小,。

6,、 將剪好的臍帶均勻鋪于培養(yǎng)皿或T75培養(yǎng)瓶中，間隔5mm左右,。

7,、 靜置5-10分鐘后，加入wan全培養(yǎng)基,，放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中（條件為5%CO₂,、37℃）。

8,、 培養(yǎng)3天后,，鏡下觀察有無(wú)細(xì)菌污染，進(jìn)行半量換液,。

9,、 細(xì)胞培養(yǎng)至7-10天可見(jiàn)長(zhǎng)梭形細(xì)胞從組織塊內(nèi)爬出，7天進(jìn)行全換液,。

10,、培養(yǎng)至12-15天可見(jiàn)大量細(xì)胞爬出,，此時(shí)爬出的細(xì)胞記為P0。

11,、待組織塊周邊細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%左右時(shí),，0.25%胰酶消化液（貨號(hào)B03003或B03001）消化細(xì)胞進(jìn)行傳代。并記為P1,，以此類推,。

間充質(zhì)干細(xì)胞傳代

1、待細(xì)胞融和度達(dá)到約80-90%進(jìn)行傳代（注：細(xì)胞不能太密集,，否則容易分化）,，吸棄培養(yǎng)皿或瓶中培養(yǎng)基。

2,、加適量DPBS輕輕沖洗1次,。

3、加入0.25%胰酶消化液,，室溫作用,。

4、顯微鏡下觀察細(xì)胞wan全脫落后,，用移液器輕輕吹打細(xì)胞,，使細(xì)胞wan全脫落。

5,、若使用B03001胰酶消化液,，500g離心10min。若使用B03003胰酶消化液則無(wú)需離心,，直接進(jìn)行步驟7,。

6、棄上清,，用wan全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞,。

7、按照6000-8000個(gè)細(xì)胞/cm²的密度進(jìn)行傳代,，例如T175培養(yǎng)瓶中加入25mL細(xì)胞懸液,。

8、均勻鋪在培養(yǎng)皿或瓶底部,，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

9、每2-3天更換一次wan全培養(yǎng)基,，并記為P2,、P3等。

間充質(zhì)干細(xì)胞凍存

1,、待細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%左右時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

2、收集細(xì)胞,，將細(xì)胞團(tuán)重懸在1mL無(wú)血清細(xì)胞凍存液（貨號(hào)B04001）中,。

3、裝入凍存管,，無(wú)需程序降溫可直接-80℃冰箱保存1年,。

注：如需轉(zhuǎn)入液氮罐中長(zhǎng)期凍存，可在-80℃保存一天后轉(zhuǎn)入液氮罐中,。

注意事項(xiàng)

1,、MSC分離時(shí)確保組織塊始終貼壁，換液動(dòng)作要輕柔,，避免沖動(dòng)組織塊,。

2、MSC分離過(guò)程中尤其是初期更換培養(yǎng)基量不宜過(guò)多,，以免組織塊漂浮,。

3、本產(chǎn)品基于UltraGRO™-Advanced添加劑開(kāi)發(fā),，適配性非常好,，可直接使用。

4,、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

5,、本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究使用，不得用于診斷或治療,。