在臨床診斷與生命科學研究領域,，乳酸脫氫酶（LDH）檢測是一項具有價值的指標。精準規(guī)范的檢測操作流程,，是獲取可靠檢測數(shù)據(jù)的關鍵前提,。

樣本采集與前處理規(guī)范

血液是 LDH 檢測常見樣本類型,。采集時，需采用干燥,、無添加劑的專用采血管,，采血量一般控制在 3 - 5ml。采血后,，應輕輕顛倒采血管 8 - 10 次,，確保血液與抗凝劑充分混勻,，防止血液凝固,。對于血清樣本,，需在室溫下靜置 30 分鐘，待血液凝固后再進行離心,。離心轉速設置為 3000rpm,，持續(xù)離心 10 分鐘，此參數(shù)是經(jīng)過大量實驗驗證得出的條件,，既能有效分離出血清,，又可避免細胞破損釋放過多 LDH 造成檢測結果偏高。離心后的血清應盡快進行檢測,，若不能及時檢測,，需放置于 2 - 8℃冰箱中保存，但保存時間不宜超過 24 小時,。

試劑準備與加樣要點

LDH 檢測試劑盒在使用前需提前 30 分鐘從冰箱取出,，放置至室溫平衡。試劑平衡至室溫的過程,，猶如喚醒沉睡的檢測系統(tǒng),，各組分活性逐漸恢復至最佳狀態(tài)。加樣時,，移液器需精準校準,，誤差控制在 ±2% 以內(nèi)。吸取樣本時,，移液器槍頭應垂直插入樣本液面下 2 - 3mm 處,，避免產(chǎn)生氣泡。加樣量根據(jù)試劑盒說明書要求,，一般在 20 - 50μl 之間,。加樣動作需輕柔而準確，加樣后輕輕晃動反應板,，使樣本與試劑充分混合，但晃動幅度不宜過大,，以防液體濺出,。

酶反應啟動與孵育條件控制

當樣本與試劑混合均勻后，酶反應即刻啟動,。LDH 在催化反應中發(fā)揮關鍵作用,，將乳酸轉化為丙酮酸，同時伴隨著 NAD+ 還原為 NADH,。這個過程對溫度極為敏感,，37℃是最適反應溫度,。實驗室常用水浴孵箱或酶標儀自帶孵育功能進行溫控。孵育時間一般設定為 15 - 30 分鐘,，時間過短,，反應不充分，吸光度值偏低,；時間過長,，可能導致反應體系中底物耗盡，酶活性下降,，同樣影響檢測結果準確性,。

信號讀取與結果分析要點

孵育完成后，使用酶標儀在 340nm 波長下讀取吸光度值,。340nm 是 NADH 特征吸收峰,，吸光度值與樣本中 LDH 活性呈正相關。讀取時,，酶標儀需預熱 30 分鐘,，光路系統(tǒng)需保持清潔，避免灰塵或液體殘留干擾光信號傳輸,。結果分析時,，依據(jù)試劑盒提供的標準曲線方程進行計算。標準曲線需定期重新繪制,，以驗證試劑盒性能穩(wěn)定性,。若檢測結果超出標準曲線線性范圍，需對樣本進行適當稀釋后重新檢測,。

質(zhì)控品同步檢測與結果評估

每次檢測都應同步檢測低,、中、高三個濃度的質(zhì)控品,。質(zhì)控品猶如檢測系統(tǒng)的 “標尺”,，其結果可反映整個檢測流程的準確性與精密度。低濃度質(zhì)控品結果波動范圍應控制在 ±10% 以內(nèi),，中、高濃度控制在 ±8% 以內(nèi),。若質(zhì)控結果偏離此范圍,，需立即排查問題，可能是試劑配制錯誤,、儀器校準偏差或操作步驟失誤等,。只有質(zhì)控合格的檢測結果，才具有臨床參考價值,。