全自動氨基酸分析儀基于離子交換色譜原理,結合茚三酮柱后衍生和光度法檢測技術,,實現對氨基酸的高效分離與定量分析,。其核心在于利用陽離子交換樹脂對氨基酸的特異性吸附作用,結合流動相的pH梯度洗脫,,實現復雜樣品中氨基酸的精準分離,。
技術原理
氨基酸混合物在流動相(緩沖溶液)推動下,流經裝有陽離子交換樹脂的色譜柱,。不同氨基酸因結構,、酸堿性、極性差異,,與樹脂中的交換基團發(fā)生離子交換,,吸附能力不同。通過調節(jié)洗脫液的pH值和離子濃度,,氨基酸按洗脫能力順序逐一釋放,。洗脫出的氨基酸與茚三酮試劑在柱后反應器中混合,,于115-120℃下發(fā)生顯色反應,生成紫色或黃色化合物,。這些有色產物在570nm(紫色)和440nm(黃色)波長下的吸光度與氨基酸濃度呈線性關系,,符合朗伯-比爾定律,從而實現定量分析,。
工作流程
樣品處理:蛋白質樣品需經酸水解或酶解,,將蛋白質分解為游離氨基酸。游離氨基酸樣品可直接上樣,。
氨基酸分離:樣品注入色譜柱后,,通過三梯度分離技術(溫度、濃度,、pH梯度)優(yōu)化分離效果,,確保難分離組分(如色氨酸)的分離度。
檢測與數據處理:分離后的氨基酸與茚三酮反應生成有色產物,,經可見光檢測器檢測吸光度,。儀器自動繪制色譜圖,通過峰面積計算氨基酸含量,,并生成定量報告,。
該技術具有高靈敏度(檢測限可達3-50pmol)、高重現性(峰面積重現性RSD≤1%)和自動化程度高的特點,,廣泛應用于食品,、醫(yī)藥、農業(yè)等領域,。
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