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可見分光光度計(jì)的工作原理

來(lái)源:吉林市吉分儀器有限公司   2025年06月11日 09:48  

一,、基本原理:光的吸收與朗伯 - 比爾定律

光吸收的本質(zhì)

當(dāng)可見光(波長(zhǎng)范圍約 400-760nm)通過(guò)被測(cè)物質(zhì)的溶液時(shí),溶液中的分子或離子會(huì)選擇性吸收特定波長(zhǎng)的光,,導(dǎo)致光的強(qiáng)度減弱,。物質(zhì)對(duì)光的吸收程度與物質(zhì)的濃度、液層厚度等因素相關(guān),。

二,、儀器結(jié)構(gòu)與工作流程

1. 核心組件及功能

組件功能描述

光源發(fā)射連續(xù)可見光,常用鎢燈(覆蓋 320-2500nm,,適用于可見光譜段),。

單色器將復(fù)合光分解為單色光,通過(guò)棱鏡或光柵實(shí)現(xiàn)波長(zhǎng)選擇,,確保入射光為單一波長(zhǎng),。

比色皿盛放被測(cè)溶液,材質(zhì)為玻璃(適用于可見光),,液層厚度通常為 1cm,。

檢測(cè)器如光電管或光電倍增管,將光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào),,測(cè)量透射光強(qiáng)度,。

信號(hào)處理與顯示系統(tǒng)放大電信號(hào)并轉(zhuǎn)換為吸光度或濃度值,通過(guò)顯示屏輸出結(jié)果,。

三,、定量分析步驟與應(yīng)用邏輯

樣品預(yù)處理

將被測(cè)物質(zhì)溶解或反應(yīng)生成能吸收可見光的化合物(如顯色反應(yīng)),確保溶液均勻透明,。

波長(zhǎng)選擇

選擇被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)(λmax)作為測(cè)量波長(zhǎng),,此時(shí)靈敏度最高,誤差最小,。例如,,測(cè)定鐵離子時(shí),常通過(guò)顯色反應(yīng)生成紅色絡(luò)合物,,選擇 510nm 波長(zhǎng)測(cè)量,。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)量其吸光度,,以濃度為橫坐標(biāo),、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,確定線性關(guān)系。

樣品測(cè)量與計(jì)算

測(cè)量樣品溶液的吸光度,,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線或朗伯 - 比爾定律計(jì)算樣品濃度,。

四、關(guān)鍵影響因素與注意事項(xiàng)

溶液狀態(tài)

溶液需均勻無(wú)渾濁,,否則顆粒會(huì)散射光,,導(dǎo)致吸光度測(cè)量偏差。

波長(zhǎng)準(zhǔn)確性

單色器波長(zhǎng)校準(zhǔn)需精準(zhǔn),,若波長(zhǎng)偏移,,會(huì)導(dǎo)致摩爾吸光系數(shù)變化,影響濃度計(jì)算精度,。

比色皿誤差

比色皿材質(zhì),、厚度一致性及清潔度需嚴(yán)格控制,不同比色皿間的透光率差異會(huì)引入誤差,。

環(huán)境與儀器穩(wěn)定性

光源強(qiáng)度波動(dòng),、檢測(cè)器靈敏度變化或溫度波動(dòng),均可能影響測(cè)量重復(fù)性,。

五,、應(yīng)用場(chǎng)景與行業(yè)實(shí)例

化學(xué)分析:水質(zhì)中重金屬(如銅、鐵)含量測(cè)定,、食品中添加劑(如亞硝酸鹽)檢測(cè),。

生物醫(yī)藥:蛋白質(zhì)濃度測(cè)定(Bradford 法、Lowry 法),、藥物含量分析,。

環(huán)境監(jiān)測(cè):廢水 COD(化學(xué)需氧量)、氨氮濃度的快速檢測(cè),。

工業(yè)生產(chǎn):化工原料純度分析,、染料濃度控制等。


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