人3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書
　　本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                          96T
　20 IU/L -480 IU/L

使用目的：
　　本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）含量,。
實驗原理
　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）水平。用純化的人3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH），再與HRP標記的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）濃度,。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（960IU/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
人3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
480 IU/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
240 IU/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
120 IU/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
60 IU/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
30 IU/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
溫育：操作同3,。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結：

計算
　  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第人3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書
一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個月
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