1.保存血清的辦法,?
我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,。若你一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),,再放回冷凍,。
2.如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損,?
我們建議您將血清從冷凍箱中取出后,,先置于2-8℃冰箱中使之溶解,,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。
3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理,?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多原因,,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的;而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,,也會存在于血清中,,亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,,并不影響血清本身的質(zhì)量,。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管中,,以400g稍微離心,,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞您的過濾膜,。
4.何謂熱滅活?有必要做熱滅活嗎,?
一般以56℃,,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,,可以使補體去活性,,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,,肥大細胞和血小板組胺的釋放,,增強吞噬作用,淋巴細胞,、巨噬細胞的趨化和激活,。
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,。經(jīng)過處理的血清對細胞生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,,而造成細胞生長速率的降低,。
而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會使此沉淀物更增多,使研究者認為是微生物的分裂擴增,。
因此我們建議您,若非必須,,您可以不需要做熱滅活這一步,。如此以來,不但節(jié)省您寶貴的時間,,更確保您血清的質(zhì)量,!
5.如何避免沉淀物的出現(xiàn)?
我們建議您在使用血清的時候,,注意正確的血清解凍步驟,,并盡量避免滅活血清及長時間的將血清置于高溫環(huán)境中.
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