前言根據(jù) GB/T 4927 的規(guī)定，啤酒是以麥芽,、水為主要原料,，加啤酒花，經(jīng)酵母發(fā)酵釀制而成的酒類制品,。成品啤酒由豐富的物質(zhì)組成,，包含酯類、醇類,、酚類,、氨基酸等，其中酚類化合物在啤酒中扮演重要角色,。特定而言,，在生產(chǎn),、運輸,、貯藏,、使用等階段，酚類物質(zhì)可能與含氯的水,、容器和空氣等接觸,，發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成具有特殊味道的氯苯酚類物質(zhì),，使啤酒產(chǎn)生消毒水,、臭味等味道，導(dǎo)致啤酒口感變化,；同時,，氯苯酚類物質(zhì)本身也具有一定的毒性，對人體有致癌性,、致畸性[1],。因此，全流程密切監(jiān)測啤酒中的氯苯酚類化合物對于保證啤酒的品質(zhì)和安全性至關(guān)重要,。氯苯酚類化合物是一類含氯的苯酚衍生物,，根據(jù)氯元素在苯環(huán)上的位置、取代數(shù)量等的不同,，包括多達十幾種化合物,。通常檢測的幾種含氯苯酚化合物包括鄰氯苯酚、2,4-二氯苯酚,、2,6-二氯苯酚,、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚，可用分析方法主要有液相色譜法[2,3] 和液質(zhì)聯(lián)用方法,、氣相色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用方法,。由于氯苯酚類化合物極性大、難電離,，采用氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用方法進行分析時,，一般需要在樣品前處理中對目標化合物進行衍生，分析難度較高,。

液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用方法是目前針對氯苯酚類化合物的主要分析技術(shù),，有利于簡化樣品前處理過程，提升分析效率,，并實現(xiàn)準確定性和定量,。關(guān)于液相色譜法測定啤酒中的上述五種氯苯酚類化合物，暫未查到相關(guān)文獻報道,。但用于測定氯苯酚類化合物的液相色譜方法一般采用傳統(tǒng)的高效液相色法 (HPLC),，分離效率和分離能力較低，不利于快速分析,。本文采用 Agilent 1290 II UHPLC 結(jié)合 Poroshell 120Bonus-RP 色譜柱,，開發(fā)出一種針對五種氯苯酚類化合物的快速分析方法,，可準確分離啤酒中的五種氯苯酚類化合物。經(jīng)過初步方法學(xué)驗證,，該方法適用于準確測定啤酒中的五種氯苯酚類物質(zhì),。

實驗部分試劑和樣品甲醇、磷酸為色譜純,，購于迪馬公司,；所用實驗用水為 MilliporeMilli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；鄰氯苯酚,、2,4-二氯苯酚,、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚購于阿拉??；樣品為市售產(chǎn)品。

儀器和設(shè)備采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng) ,，配備如下安捷倫模塊：四元泵（部件號 G7104A）,、自動進樣器（部件號 G7167B）、柱溫箱（部件號 G7116B）和二極管陣列檢測器（部件號 G7117A）,。色譜柱選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 Bonus-RP（4.6 × 100 mm, 2.7 μm,；部件號 695968-901）。標準品制備標準品儲備液：精密稱取鄰氯苯酚,、2,4-二氯苯酚,、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚,、2,3,4,6-四氯苯酚各標準物質(zhì)適量,，置于容量瓶中，加甲醇適量,，超聲使其溶解,，然后用甲醇定容至刻度，制得 2000 μg/mL 標準品儲備液,。標準品工作溶液：取標準品儲備液適量,，加 50% 甲醇，逐級稀釋制得 4 μg/mL,、8 μg/mL,、16 μg/mL、32 μg/mL,、40 μg/mL,、80 μg/mL 和 160 μg/mL 的標準品工作溶液。

樣品前處理取啤酒,，打開蓋子,，緩慢從瓶中傾出部分啤酒至干凈的 40 mL 頂空瓶中,；輕輕晃動，緩慢除去大量氣體,；然后將頂空瓶置至超聲儀中，超聲脫氣約 1 min,；取脫氣后的啤酒,，過 0.22 μm 微孔濾膜后上機分析

結(jié)果與討論五種氯苯酚類物質(zhì)分離結(jié)果按照上述實驗方法，進樣分析空白試劑（50% 甲醇-水）,、五種氯苯酚類標準品工作溶液（濃度為 40 μg/mL）和三種啤酒樣品溶液,，所得五種氯苯酚類化合物的分離結(jié)果如圖 1 所示。從圖中可以看出,，空白試劑在氯苯酚類各物質(zhì)色譜峰對應(yīng)的保留時間處無干擾,；在標準工作溶液中，氯苯酚類各物質(zhì)色譜峰分離良好,；在啤酒樣品中,，未檢出氯苯酚類各物質(zhì)的色譜峰，且無其他成分干擾,。

方法檢出限根據(jù) S/N = 3 計算方法檢超出限 (LOD),。由于鄰氯苯酚和 2,6-二氯苯酚的檢測波長為 276 nm，而 2,4-二氯苯酚,、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚的檢測波長為 290 nm,，因此分別取這兩個波長下的噪音來計算各目標化合物的 LOD。結(jié)果表明,，在 1 μL 進樣量,、檢測波長276 nm 下，鄰氯苯酚的 LOD 為 0.196 μg/mL,，2,6-二氯苯酚的 LOD 為 0.336 μg/mL,；在 1 μL 進樣量、檢測波長 290 nm 下,，2,4-二氯苯酚的 LOD 為 0.121 μg/mL,，2,4,6-三氯苯酚的 LOD 為 0.0923 μg/mL，2,3,4,6-四氯苯酚的 LOD 為 0.107 μg/mL,。如果分析人員在實際應(yīng)用中需要獲得更低的方法檢出限,，可以采用增加進樣量和換用 60 mm 流通池等措施。

氯苯酚類物質(zhì)的純度1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)配置二極管陣列檢測器,，可以對色譜峰進行全波長掃描,，并進行純度分析。由于在分析的啤酒樣品中未檢出五種氯酚類物質(zhì),，因此采用加標樣品進行純度判定,。向啤酒樣品中添加 5 μg/mL 各氯苯酚類物質(zhì),，然后進樣分析，進行純度分析處理,。結(jié)果列于表 3 中,。從表中可以看出，四種啤酒加標樣品中的五種氯苯酚類物質(zhì)色譜峰純度良好,，純度因子均大于0.999,，提示各分析物的色譜峰均未受到干擾。

結(jié)論本文建立了啤酒中五種氯苯酚類物質(zhì)的快速分析方法,。該方法使五種氯苯酚類物質(zhì)獲得了良好的分離度,，初步方法學(xué)考察結(jié)果（包括分離度、靈敏度,、回收率和重復(fù)性等指標）表明,，該方法符合液相色譜定性和定量分析的要求。該方法采用 Poroshell 120 核殼工藝色譜柱,，可以在較低的柱壓下獲得較高的柱效,，同時實現(xiàn)快速分離。該色譜柱與同規(guī)格,、相同鍵合相的全多孔亞 2 μm 色譜柱相比,，柱效達到亞 2 μm 柱的90%，但是柱壓僅為亞 2 μm 柱的 40%–50%,。因此,，借助該色譜柱，該方法可實現(xiàn)低壓,、快速分離,，在 10 min 內(nèi)即可完成對五種氯苯酚類物質(zhì)的分析。由于氯苯酚類物質(zhì)具有防腐,、殺菌,、殺蟲、防霉作用,，因此在環(huán)境,、紡織、印染,、家具等行業(yè)也有廣泛應(yīng)用,，且由于其對人體的毒性而受到嚴格監(jiān)管。在排除干擾物質(zhì)的前提下,，本文所述的方法也有望作為這些行業(yè)中監(jiān)測氯苯酚類化合物的參考方法,。