前 言

2025年版《中國藥典》將于10月1日起正式實施,，在生物制品質(zhì)量控制及病毒安全性評價方面做出了關(guān)鍵修訂,，對推動生物醫(yī)藥行業(yè)發(fā)展十分重要,。

在保持與國際接軌的同時,，基于WHO,、ICH等國際相關(guān)指導(dǎo)原則的變化趨勢，結(jié)合我國生物制品發(fā)展的需求,，“生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”部分被拆分為兩部分：“生物制品生產(chǎn)用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制（通則0234）”和“生物制品檢定用動物細胞質(zhì)量控制（通則0235）”,。

通則0234首-次新增昆蟲細胞的適用范圍，加入風(fēng)險評估策略,，優(yōu)化細胞庫檢定項目,，并在傳統(tǒng)檢測方法基礎(chǔ)上新增病毒核酸擴增方法或NGS（下一代測序或高通量測序）法作為補充或替代的內(nèi)容，提升檢測的科學(xué)性,、合理性和安全性,。

通則0235在2020年版版藥典內(nèi)容基礎(chǔ)上,，新增了針對特定基因修飾細胞的具體檢測要求，涵蓋構(gòu)建過程,、特征鑒別,、使用代次內(nèi)穩(wěn)定性等方面，滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展需要,。

為更好的遵循監(jiān)管要求進行藥品的研制,、生產(chǎn)和質(zhì)量管理，義翹神州將與大家一起對2025年版《中國藥典》“通則0234”和“通則0235”的變化進行詳細解讀,。今天我們先解讀“細胞檢定”項目要求的變化,。

注：以下內(nèi)容中，綠色字體表示更改內(nèi)容,，紅色字體為新增內(nèi)容,。

一、細胞檢定項目要求的總體變化與解讀

1細胞檢定

2025年版藥典：細胞檢定主要包括以下幾個方面：細胞鑒別,、外源因子和內(nèi)源因子的檢查,、成瘤性/致瘤性檢查等。必要時還須進行細胞生長特性,、細胞染色體檢查,、細胞均一性及穩(wěn)定性檢查。這些檢測內(nèi)容對于MCB細胞和WCB細胞,、生產(chǎn)終末細胞（EOPC）或生產(chǎn)限定代次細胞均適用,。

修改說明：增加生產(chǎn)限定代次細胞可代替生產(chǎn)終末細胞（EOPC）

2細胞檢定項目要求

2025年版藥典：應(yīng)對細胞來源、培養(yǎng)及建庫過程進行風(fēng)險評估,，并制定檢定策略,。通常應(yīng)至少對MCB細胞及EOPC細胞或生產(chǎn)限定代次細胞進行一次全面檢定， WCB細胞進行部分檢定,。如對MCB細胞不能進行全面檢定，可對首-個WCB細胞進行全面檢定,，后續(xù)建立的WCB細胞可通過評估后進行部分檢定,。當(dāng)生產(chǎn)工藝發(fā)生變更時，需經(jīng)評估,，必要時應(yīng)重新對EOPC細胞或生產(chǎn)限定代次細胞進行檢測,。細胞檢定的基本要求見表1。

修改說明：

1. 增加需根據(jù)風(fēng)險評估制定檢定策略,；

2. 增加生產(chǎn)限定代次細胞可替代EOPC進行全檢,；

3. 增加首-個WCB全檢可替代MCB

4. 增加生產(chǎn)工藝變更時，可經(jīng)評估是否重新檢測,。

解讀：

· 檢定策略制定中引入風(fēng)險評估的理念

· 明確了主庫,、工作庫的檢定策略

· 某些細胞治療產(chǎn)品（干細胞,、CAR-T細胞等）MCB數(shù)量是有限的，進行WCB全檢對樣品量具有挑戰(zhàn)性,，可首-個WCB全檢替代MCB

· 不是所有的工藝變更都要復(fù)檢EOPC,，需要經(jīng)過評估后確定是否需要復(fù)檢

表1：細胞檢定的基本要求

注：“+”為必檢項目，“-”為非強制檢定項目,，（+）表示需要根據(jù)細胞特性,、傳代歷史、培養(yǎng)過程等情況評估后進行的檢定項目,。

a. EOPC,，是指達到或超過生產(chǎn)末期時收獲的細胞，盡可能取按生產(chǎn)規(guī)模制備的生產(chǎn)末期細胞,。

b. 對分枝桿菌易感的細胞進行該項檢查,。

c. 根據(jù)風(fēng)險評估結(jié)果確定是否進行體內(nèi)實驗，如在建庫或細胞培養(yǎng)過程中存在外源因子引入的風(fēng)險,，可進行體內(nèi)實驗或用經(jīng)驗證的NGS法替代,。

d. 從MCB或WCB復(fù)蘇細胞，擴增至或超過生產(chǎn)用細胞齡限制代次作為待檢樣本,。

修改說明：

1. 增加生產(chǎn)限定代次細胞（LIVCA）可替代EOPC

2. 更改EOPC/LIVCA細胞鑒別為必檢項 

3. 新增螺原體檢查 

4. 刪除細胞形態(tài)觀察及血吸附試驗

5. 更改MCB及EOPC/LIVCA動物和雞胚體內(nèi)接種法為可選項,，且可用經(jīng)驗證的NGS方法替代 

6. 刪除染色體檢查，染色體檢查作為新建二倍體細胞的檢測項目,，不放在細胞基質(zhì)總的檢定要求

7. 更改EOPC/LIVCA成瘤性檢查為可選項 

8. 增加成瘤性/致瘤性檢查待檢樣本要求

9. 增加穩(wěn)定性檢查,，為可選項（原為重組細胞的特殊要求，現(xiàn)調(diào)整至此處）

二,、細胞檢定項目及方法的變化與解讀

1細胞鑒別

2025年版藥典：細胞庫（MCB和WCB）和生產(chǎn)終末細胞或生產(chǎn)限定代次細胞應(yīng)進行鑒別試驗,，以確認所用細胞正確，且無其他細胞的交叉污染,。重組細胞系的專屬特性的鑒別,，還應(yīng)通過檢測目的蛋白基因或目的蛋白進行鑒別試驗。細胞鑒別試驗方法有多種,，包括細胞形態(tài),、生物化學(xué)法（如同工酶試驗）、免疫學(xué)檢測（如組織相容性抗原,、種特異性免疫血清）,、細胞遺傳學(xué)檢測（如染色體核型、標(biāo)記染色體檢測）,、遺傳標(biāo)志檢測［如DNA指紋圖譜,，包括短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）、限制片段長度多態(tài)性（RFLP PCR）和內(nèi)含子多態(tài)性（EPIC-PCR）法等］以及其他方法（如雜交法、PCR法,、報告基因法等）,。應(yīng)至少選擇上述一種或幾種方法對細胞進行種屬和細胞株間及專屬特性的鑒別。種屬鑒別可依法檢查（通則 3430）,。

修改說明：

1. 刪除“新建細胞系/株的鑒別要求”

2. 更改鑒別試驗結(jié)果“確認為本細胞”為“確認所用細胞正確”

3. 更改重組細胞系的專屬特性鑒別要求的位置

4. 增加種屬鑒別依通則3430檢查

解讀：

· 種屬鑒別法（通則3430）,，內(nèi)容均為分子類方法，并提到傳統(tǒng)的生物化學(xué)法,，如同工酶法,，準(zhǔn)確性差，靈敏度低,。

2細菌,、真菌檢查

2025年版藥典：分別取混合細胞培養(yǎng)上清液和凍存細胞管樣品，依法檢查（通則1101）,，應(yīng)符合規(guī)定,。對于MCB及WCB培養(yǎng)物，至少取混合細胞培養(yǎng)上清液10 ml,，盡可能采用薄膜過濾法檢測,。對于凍存細胞，至少取凍存細胞總支數(shù)的1%或至少2支凍存細胞管（取量大者）,，可采用直接接種法檢測,。

通則1101

• 制備好的培養(yǎng)基若不及時使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中,，在 2~25℃,、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗證的保存期內(nèi)使用,。

• 培養(yǎng)基無菌性檢查每批隨機取部分培養(yǎng)基,。 

• 方法適用性實驗對大腸埃希菌敏感的抗生素類產(chǎn)品宜選用大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。

• 培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長,。

• 實驗室應(yīng)基于質(zhì)量風(fēng)險管理的要求,，綜合評估確定日常檢驗過程中陽性對照試驗的必要性。

修改說明：

1. 更改“細菌,、真菌無菌檢查”為“細菌,、真菌檢查”

2. 更改“取混合細胞培養(yǎng)上清液或凍存細胞管樣品”為“分別取混合細胞培養(yǎng)上清液和凍存細胞管樣品”

3. 培養(yǎng)基不需要避光保存，無菌性檢查對檢查數(shù)量不做規(guī)定

4. 適用性試驗將大腸埃希菌替換為銅綠假單胞菌,，但對大腸埃希菌敏感的抗生素類樣品還需用大腸埃希菌

5. 無菌檢查硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)置于一個溫度即可

6. 增加了質(zhì)量風(fēng)險管理的要求，評估日常檢驗中陽性對照試驗的必要性

解讀：

· 需要做細胞培養(yǎng)上清液和凍存細胞管兩種樣品

· 與國際方法接軌,，硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基減少為一個培養(yǎng)溫度,，陽性對照無強制要求

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義翹神州能夠提供病毒清除驗證和細胞庫檢測方案,，為企業(yè)藥品申報保駕護航，助力客戶順利完成IND和BLA的國內(nèi)外申報工作,。截止目前,，已成功完成5000+樣品的細胞庫檢測及5000多次病毒清除驗證研究，涉及的產(chǎn)品類型有抗體,、蛋白,、疫苗等。協(xié)助客戶完成近300+項目申報,，申報成功率高,。

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