干貨分享 | DNA凝膠回收總踩坑？操作步驟及常見問題解析看這里
在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域,，基因克隆,、基因表達分析、PCR產(chǎn)物驗證等實驗對DNA樣本的純度與完整性要求較高,。DNA凝膠回收作為獲取高純度目標(biāo)DNA片段的關(guān)鍵技術(shù),，其標(biāo)準(zhǔn)化操作流程與實驗耗材的選擇，對后續(xù)實驗的順利開展具有重要影響,。

從樣本預(yù)處理,、DNA吸附洗脫到雜質(zhì)去除的每個環(huán)節(jié)，不僅需要科學(xué)嚴(yán)謹?shù)牟僮鞑襟E,，還需優(yōu)質(zhì)的適配實驗耗材,，以有效降低樣本損失與外源污染風(fēng)險。愛津生物純化柱憑借其可靠的性能表現(xiàn),，可在DNA凝膠回收流程中發(fā)揮重要作用,，為科研工作者提供實驗支持。

01 實驗原理剖析

PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳后,，按分子量大小被分開,，排列在凝膠中，跟DNA Marker分子量的對比下,，找到目的DNA帶所在的凝膠,，并把它切下來，加熱或用特殊的試劑熔解凝膠,，使DNA溶回到溶液中,，再經(jīng)過乙醇沉淀或過柱即可獲得目的DNA片段。

02 實驗操作流程

① 樣本預(yù)處理與結(jié)合緩沖液混合
將PCR反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至1.5mL微量離心管,，按1:3比例加入Binding Buffer I,。
② DNA吸附與初步離心
將純化柱置于一個2mL收集管中，將上一步驟的混合液轉(zhuǎn)移至純化柱中,，室溫豎直放置2分鐘,，隨后以8000 rpm的轉(zhuǎn)速離心1分鐘。
③ 第一次洗滌雜質(zhì)去除
棄去收集管中的液體，向純化柱中加入500μL Wash Solution,，12000 rpm離心1分鐘,，棄去收集管中的液體，將純化柱放回原來的收集管中,。愛津純化柱可提供裝配優(yōu)質(zhì)玻璃纖維膜,，在洗滌過程中既能高效截留DNA，性能穩(wěn)定,，重復(fù)性好,，確保DNA純度。

④ 二次洗滌深度凈化
再次添加500μL Wash Solution到純化柱中,，12000 rpm離心1分鐘,。棄去收集管中的液體，隨后再次離心,，去除殘留的Wash Solution,。
⑤ DNA洗脫與保存
將純化柱轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL微量離心管，在純化柱膜中央加入30 - 50μL Elution Buffer,，50℃溫浴2分鐘,。12000 rpm離心1分鐘，將PCR產(chǎn)物置于-20℃冷凍保存或立即試用,。愛津純化柱可實現(xiàn)輕松單手開合,，且密封性強，有效避免樣本在操作過程中受到污染,。

03常見問題深度剖析與解決方案
① 目的產(chǎn)物回收率低
問題原因
? 紫外燈下切膠操作耗時過長,，導(dǎo)致核酸長時間暴露于紫外輻射，分子結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化,，從而失去功能,；
? 電泳時所使用的緩沖液長期未更換，pH值發(fā)生改變,，影響DNA吸附,。
解決方法
? 優(yōu)化切膠流程，縮短紫外照射時間,；
? 定期更換電泳緩沖液,，確保其pH值處于適宜范圍。
② 洗脫效率低
問題原因
? 洗滌步驟后,，殘留乙醇未充分揮發(fā),，阻礙DNA從純化柱膜上洗脫；
? Elution Buffer未準(zhǔn)確滴加至膜上,，導(dǎo)致DNA溶解不充分,。
解決方法
? 溶液轉(zhuǎn)移至純化柱加入Wash Solution離心兩次后,，需將裝有純化柱的管蓋打開靜置，使殘留乙醇充分揮發(fā),；
? 添加Elution Buffer時,，必須確保緩沖液直接滴在膜上。
③ 瓊脂糖凝膠未全部融化
問題原因
? 55℃水浴溶膠過程中,，凝膠未充分混勻,，導(dǎo)致局部未全部溶解；
? 膠塊體積過大,，不僅會降低溶膠效率,，導(dǎo)致溶液pH值異常，還可能使溶液顏色發(fā)生改變,。
解決方法
? 溶膠時多次上下顛倒使凝膠充分融化混勻，確保無固體瓊脂糖殘留,，膠溶化后,，一般情況下，將呈現(xiàn)淡黃色或幾乎無色,；
? 若膠塊過大,，可適當(dāng)增加溶膠液用量，直至溶液顏色恢復(fù)正常,。
④ 凝膠切塊過大
問題原因

未精準(zhǔn)切除不含目的片段的瓊脂糖凝膠,，導(dǎo)致凝膠體積過大，增加后續(xù)處理難度,，影響DNA回收率與純度,。

解決方法仔細辨別目的條帶，盡可能切除多余凝膠,，減小凝膠體積,，提高 DNA回收效率與純度。
⑤ 外源DNA污染問題原因?qū)嶒灜h(huán)境清潔度不達標(biāo),，操作過程未嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,，導(dǎo)致外源DNA混入樣本。解決方法確保實驗在潔凈環(huán)境中進行,，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作流程,，減少外源DNA污染風(fēng)險。
04注意事項
① 試劑使用規(guī)范
要嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作,，例如Wash Solution中是否需要加入一定體積的無水乙醇,，體積數(shù)目根據(jù)試劑盒試劑要求而定等。
② 安全防護措施
核酸染料多具有潛在毒性,，操作過程中需佩戴手套,、護目鏡等防護裝備,，規(guī)范處理廢棄物，避免環(huán)境污染與人體傷害,。
05相關(guān)產(chǎn)品推薦-愛津純化柱

在DNA凝膠回收實驗常遇回收率不理想,、樣本易受污染等情況時，愛津純化柱以多項性能優(yōu)勢,，為實驗順利開展提供可靠支持,。

? 采用符合USP Class VI標(biāo)準(zhǔn)的進口高分子聚丙烯（PP）材質(zhì)，無熱原,、無內(nèi)毒素,、無DNase/RNase；
? 壁厚均勻,，高速離心不爆管,，安全可靠；
? 可承受高速離心,，最大離心力可達24000xg,；
? 高精度模具生產(chǎn)，無表面涂層,，不會污染樣品,；
? 可輕松單手打開和關(guān)閉，密封嚴(yán)實,；
? 可提供裝配優(yōu)質(zhì)玻璃纖維膜,，提取得率高，性能穩(wěn)定,，重復(fù)性好,，適用于PCR、酶切,、測序,、雜交等各種實驗操作。
Company Profile
關(guān) 于 愛 津
愛津生物,，成立于2009年
致力于研發(fā)生產(chǎn)生物科研領(lǐng)域所需的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品

專注生命科學(xué),、生物工程技術(shù)和實驗室耗材
堅持不斷優(yōu)化、品質(zhì)至上的原則,，將更值得信賴的產(chǎn)品交付于您
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