前言：超高通量組織研磨儀使樣品均質(zhì)化效果更好,，方便后續(xù)萃?。徽婵针x心濃縮儀濃縮樣品,，方便快捷,。

　　青霉素 G(Penicillin G)作為β-內(nèi)酰胺類抗生素對于人和動物尿道、胃腸道和呼吸道感染等疾病具有較好的治療優(yōu)勢,。[1]但是在獸用治療中的用藥不規(guī)范會導致藥物在奶和動物組織中的殘留,，這些藥物殘留及其代謝產(chǎn)物會對有相關(guān)過敏史的人產(chǎn)生健康危害。

　　超高效液相色譜-質(zhì)譜法（UPLC-MS）是一種將超高效液相色譜（UPLC）與質(zhì)譜（MS）結(jié)合的高效且精準的分離檢測技術(shù)。相關(guān)研究中采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定了肉類中青霉素 G及其代謝產(chǎn)物芐青霉噻唑酸,、芐青霉去羧噻唑酸和芐青霉二酸的方法,。

　　在此基礎(chǔ)上，我們對該實驗方法加以改良與補充,，通過超高通量組織研磨儀576對樣品進行研磨提取操作,，該方法提取質(zhì)量高，效果均一,，無交叉污染,，并經(jīng)真空離心濃縮樣品，后續(xù)通過超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法,，靈敏快速地對樣品進行檢測分析。

　　實驗步驟：

　　1,、稱取處理成小塊的組織樣品于50mL研磨管中,，加入青霉素V內(nèi)標[2]，加2mL水,，乙腈定容至20mL,，經(jīng)超高通量組織研磨儀研磨提取。

　　2,、離心后取10mL上層清液,，經(jīng)真空離心濃縮至蒸干。

　　3,、蒸干后加入2mL乙酸銨緩沖溶液溶解殘余物,，渦旋15s，加入5mL正己烷,，渦旋1min,，轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，離心去除上層有機相,，正己烷重復去脂一次,。4、吸取1mL水相于2mL聚丙烯離心管中,，離心后過水相濾膜,，待測。

　　5,、另取7支離心管中分別按標準曲線的濃度加入適量標準溶液,，再加入等量空白樣本，混勻,，放置10min后,，與樣品一起處理，制作工作曲線系列,。

　　[1]注：本實驗方法僅供參考,，具體詳細參數(shù)可查閱相關(guān)文獻確定,。

　　實驗方法優(yōu)勢：

　　在UPLC-MS方法中，樣品處理液中強極性和弱極性雜質(zhì)成分使用六通切換閥切換至廢液而不進入質(zhì)譜儀,，分析多份樣品后不需清洗質(zhì)譜儀的樣品錐,，同時采用基體匹配標準內(nèi)標法定量，有效補償了基體效應,。[1]

　　在此基礎(chǔ)上通過超高通量組織研磨儀和真空離心濃縮儀進行優(yōu)化實驗步驟,，超高通量組織研磨儀使樣品均質(zhì)化效果更好，方便后續(xù)萃??；真空離心濃縮儀補充了溶液蒸發(fā)過程中的爆沸，減去了添加飽和NaCl的步驟,，減少后續(xù)離子干擾,，使本實驗方法更快速安全，靈敏準確,。

　　文中所用儀器：

　　1,、真空離心濃縮儀

　　真空離心濃縮儀可用于化學、生物,、醫(yī)藥等領(lǐng)域的樣品制備和分析,，在生命科學領(lǐng)域中，真空離心濃縮儀常用于分離和濃縮蛋白質(zhì),、核酸和其他生物分子,。真空離心濃縮是一種將溶劑蒸發(fā)出去以濃縮或干燥生物(非生物)樣品的過程。采用離心力,、真空和加熱相結(jié)合的方法使樣品中的溶劑快速蒸發(fā),，從而達到濃縮樣品的目的，方便后續(xù)實驗的分析和檢測,。

　　2,、超高通量組織研磨儀

　　超高通量組織研磨儀是一類性能穩(wěn)定，處理通量高,，重復性好的研磨設(shè)備,，可任意定制各種規(guī)格適配器，廣泛應用于組織破碎,，生物活性物質(zhì)提取等領(lǐng)域,。

　　參考文獻：

　　[1]劉創(chuàng)基，王海,，杜振霞,，等。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定牛肉中青霉素類藥物及其代謝產(chǎn)物[J].分析化學，2011,39(05):617-622.

　　[2]European Commission,，Council Regulation ( EEC) ． 2377 /90 /EC． Off． J． Eur． Commun． ,，1990，L224: 1