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上新 | 翌圣酵母表達DNase l，告別RNA提取中的DNA污染困擾,！
在基因表達分析領域,，基因組DNA污染可謂RNA定量過程中的“隱形殺手”。即便RNA樣本中僅存在微量的基因組DNA殘留,，也極有可能使qPCR的檢測結果產(chǎn)生顯著偏差,。因此，如何消除RNA樣本中的基因組DNA干擾,，同時又不影響RNA定量的準確性,，一直是科研人員面臨的重大技術難題。
DNase I（脫氧核糖核酸酶 I）作為解決這一難題的黃金標準,，憑借的雙鏈/單鏈DNA消化能力,，在RNA研究中發(fā)揮著關鍵作用,。
DNase I簡介
DNase I是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA的非特異性核酸內(nèi)切酶。它能夠水解磷酸二酯鍵,，產(chǎn)生含有5'-磷酸基團和3'-OH基團的單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸,。DNase I最佳的工作pH范圍是7-8，其活性依賴于Ca2+,，并可被二價金屬離子如Mn2+,，Mg2+，Zn2+等激活,。在Mg2+存在條件下,，DNase I 隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；Mn2+存在條件下,，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈,，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端,。
圖1. DNase I在Mg2+以及Mn2+存在下可切割dsDNA原理圖
傳統(tǒng)DNase I技術正面臨難以突破的困境：牛胰提取法因原料來源復雜,，RNase殘留問題突出，純化過程不僅繁瑣,，且難以保證產(chǎn)品均一性,；大腸桿菌表達系統(tǒng)則受制于生物合成機制，面臨產(chǎn)量天花板問題,。
翌圣生物直擊行業(yè)痛點,，重磅推出酵母表達Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549/14550)，依托真核表達系統(tǒng)的優(yōu)勢,，實現(xiàn)兩大核心技術突破：
產(chǎn)能突破：運用真核分泌表達技術,，有效避免胞內(nèi)毒素積累，同時搭配高密度發(fā)酵工藝,，多方位提升產(chǎn)能,，滿足大規(guī)模生產(chǎn)需求；
性能升級：得益于酵母體系天然的糖基化修飾,，賦予酶更穩(wěn)定的空間結構,，即使在復雜樣本環(huán)境中,，依然能夠高效地消化DNA,。
數(shù)據(jù)展示
Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549/14550)
消化活性，媲美進口品質
分別使用不同投入量的翌圣及進口品牌Supplier A的DNase I對1 μg質粒DNA進行消化處理,，結果顯示翌圣14549ES對質粒DNA去除效率媲美Supplier A,。
圖2.質粒DNA去除效果驗證
無RNase殘留
取10 U翌圣生物Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549)與RNA底物于37℃孵育1 h，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析顯示,，三個批次的該酶制劑均未檢出RNase活性殘留,，消除RNA樣本降解風險，為對純度要求的RNA分析場景提供可靠保障。
圖3.RNase殘留結果驗證
RNA提取應用驗證
為評估翌圣生物Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549)在RNA提取中的應用效果,，取20 U該酶制劑處理12例不同來源的小鼠肝臟前處理樣本,。經(jīng)后續(xù)RNA提取及瓊脂糖凝膠電泳分析證實，該酶處理組RNA完整性良好,，表明此DNase I在有效消化DNA的同時,，不會對RNA質量產(chǎn)生影響，滿足RNA提取實驗的技術要求,。
圖4.RNA提取應用驗證
翌圣DNase I 選擇指南
Description | Catalog No. | Application |
提取自牛胰腺,，經(jīng)色譜工藝制備，核糖核酸酶A（RNase A）活性含量極低,。為凍干粉劑,。 | 10607ES | 1、從樣本中提取RNA時去除gDNA,。（如果是微量樣本,，需要用重組來源的DNase I）。 2,、蛋白質研究: 從蛋白制備物中去除DNA,。 |
提取自牛胰腺，經(jīng)色譜工藝制備,，核糖核酸酶A（RNase A）活性含量極低（≤0.0005%）,。為凍干粉劑。 | 10608ES | |
大腸桿菌重組表達DNase I (RNase-free),，大腸桿菌重組表達,，不含RNase，液體形式,。 | 10325ES | 適用于各種應用：RNA提取過程中的基因組DNA去除,、反轉錄前的基因組DNA清除、體外轉錄后模板DNA的消化,、RNA建庫過程中rRNA去除,、缺口平移法進行DNA標記、DNase I足跡法分析實驗,、需要避免動物源成分的應用場景等,。 |
畢赤酵母重組表達DNase I (RNase-free)，不含RNase,，液體形式,。 | 14549ES | |
14550ES | ||
大腸桿菌重組表達DNase I (RNase-free)，GMP-grade,，液體形式,。 | 10611ES | GMP藥用級別,。用于采用藥用規(guī)格原輔料生產(chǎn)，符合GMP規(guī)范的產(chǎn)品生產(chǎn)與質量管理規(guī)程保障生產(chǎn)過程及所有原輔料可追溯,。 |
參考文獻
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