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Thermo PA542816--DFNA5 ANTIBODY 100 microliter
高特異性：經(jīng)過嚴格的驗證和篩選過程,，該抗體僅與 DFNA5 蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,，對其他蛋白無明顯交叉反應(yīng) 。在復(fù)雜的生物樣品中,，能夠準(zhǔn)確識別 DFNA5 蛋白,，避免因非特異性結(jié)合產(chǎn)生的假陽性結(jié)果，為科研數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性提供有力保障,。例如在多種組織混合樣品的檢測中,，可清晰區(qū)分出 DFNA5 蛋白的信號，不受其他蛋白干擾,。
高靈敏度：即使樣品中 DFNA5 蛋白含量較低,，該抗體也能有效識別并結(jié)合 。能夠檢測到低至納克級別的 DFNA5 蛋白,，適用于微量樣品或 DFNA5 蛋白低表達樣本的研究,，幫助科研人員捕捉到微弱的蛋白信號，挖掘潛在的生物學(xué)信息,。
廣泛的應(yīng)用兼容性：可適用于免疫組化,、免疫熒光、免疫印跡等多種實驗技術(shù) ,。無論是在組織水平探究 DFNA5 蛋白的空間分布,，還是在細胞和分子水平分析其表達量變化,，都能發(fā)揮出色作用。并且適用于不同種屬來源的樣品,，如人,、小鼠、大鼠等,，滿足科研人員多樣化的實驗需求,。
穩(wěn)定的性能：采用先進的生產(chǎn)工藝和嚴格的質(zhì)量控制體系，保證了抗體批次間的一致性 ,。在不同時間,、不同實驗室條件下使用，均可獲得穩(wěn)定可靠的實驗結(jié)果,，減少因抗體質(zhì)量波動導(dǎo)致的實驗誤差,，有利于實驗的重復(fù)驗證和科研成果的可靠性。
方便易用：該抗體以 100 microliter 規(guī)格提供,，濃度經(jīng)過優(yōu)化,，科研人員無需復(fù)雜的稀釋等預(yù)處理，可直接按照推薦的實驗條件使用 ,。同時,，產(chǎn)品附有詳細的說明書，包含各種應(yīng)用的操作步驟,、推薦稀釋比例等信息,，即使是初次使用的科研人員也能快速上手,，順利開展實驗,。
抗體檢查：收到抗體后，立即檢查包裝是否完好,，標(biāo)簽信息是否清晰準(zhǔn)確,，包括產(chǎn)品名稱、貨號,、濃度,、有效期等 。確認無誤后,，將抗體短暫離心（低速,，如 2000 - 3000 rpm，離心 1 - 2 分鐘）,，使附著在管蓋上的抗體集中于管底,，避免損失。
樣品準(zhǔn)備：
免疫組化：對于組織樣品,，需進行固定（常用 4% 多聚甲醛）,、脫水,、包埋等處理，制成石蠟切片或冰凍切片 ,。切片厚度一般為 4 - 6 微米,，確保細胞和組織結(jié)構(gòu)完整，抗原表位暴露充分,。在實驗前,，需對切片進行脫蠟（石蠟切片）、抗原修復(fù)等預(yù)處理步驟,，恢復(fù)抗原的免疫活性,。
免疫熒光：細胞樣品可直接在細胞培養(yǎng)板中進行處理，如使用 4% 多聚甲醛固定,，0.1% Triton X - 100 進行通透處理,，使抗體能夠進入細胞內(nèi)與抗原結(jié)合 。對于組織樣品,，同樣需制成切片并進行類似的固定,、通透處理。
免疫印跡：收集細胞或組織樣品,，使用合適的裂解液進行裂解（如含蛋白酶抑制劑的 RIPA 裂解液）,，通過超聲破碎或反復(fù)凍融等方法，使細胞充分裂解,，釋放出細胞內(nèi)的蛋白質(zhì) ,。隨后進行蛋白質(zhì)定量（常用 BCA 法或 Bradford 法），確保上樣量一致,。
試劑準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好實驗所需的其他試劑,，如封閉液（常用 5% 脫脂奶粉或 BSA）、洗滌緩沖液（如 TBST：Tris - HCl 緩沖液 + Tween 20）,、二抗（根據(jù)檢測方法選擇合適的標(biāo)記二抗,，如 HRP 標(biāo)記二抗用于免疫印跡的化學(xué)發(fā)光檢測，熒光標(biāo)記二抗用于免疫熒光檢測）等 ,。所有試劑應(yīng)確保新鮮,、無污染，按照說明書要求配制和保存,。
免疫組化：
封閉：將切片置于濕盒中,，滴加封閉液，室溫孵育 1 - 2 小時,，封閉非特異性結(jié)合位點 ,。
一抗孵育：棄去封閉液，用洗滌緩沖液輕輕沖洗切片 3 次,，每次 5 分鐘 ,。然后滴加稀釋好的 DFNA5 抗體（推薦稀釋比例 1:100 - 1:500,，具體可根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果調(diào)整），4℃過夜孵育,，使抗體與 DFNA5 蛋白充分結(jié)合 ,。
洗滌：次日，棄去一抗,，用洗滌緩沖液沖洗切片 5 次,，每次 5 分鐘，洗去未結(jié)合的抗體 ,。
二抗孵育：滴加相應(yīng)的標(biāo)記二抗（如 HRP 標(biāo)記的二抗,，稀釋比例 1:200 - 1:1000），室溫孵育 1 - 2 小時 ,。
顯色：對于 HRP 標(biāo)記的二抗,，使用 DAB 顯色試劑盒進行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽性信號時,，用蒸餾水終止顯色 。
復(fù)染,、封片：用蘇木精對細胞核進行復(fù)染,，脫水、透明后,，使用中性樹膠封片,，在顯微鏡下觀察并拍照記錄結(jié)果 。
免疫熒光：
封閉：將樣品置于濕盒中,，滴加封閉液,，室溫孵育 1 小時 。
一抗孵育：棄去封閉液,，用洗滌緩沖液沖洗樣品 3 次,，每次 5 分鐘 ,。滴加稀釋好的 DFNA5 抗體（推薦稀釋比例 1:100 - 1:500）,，4℃過夜孵育 。
洗滌：次日,，用洗滌緩沖液沖洗樣品 5 次,，每次 5 分鐘 。
二抗孵育：滴加相應(yīng)的熒光標(biāo)記二抗（如 Alexa Fluor 系列熒光二抗,，稀釋比例 1:200 - 1:1000）,，室溫避光孵育 1 - 2 小時 。
封片：用含 DAPI 的抗熒光淬滅封片劑封片,，在熒光顯微鏡下選擇合適的激發(fā)波長觀察,，拍照記錄結(jié)果 ,。
免疫印跡：
上樣與電泳：將定量后的蛋白質(zhì)樣品與上樣緩沖液混合，煮沸 5 - 10 分鐘使蛋白質(zhì)變性 ,。將樣品加入 SDS - PAGE 凝膠的加樣孔中,，進行電泳（根據(jù)蛋白質(zhì)分子量大小選擇合適濃度的凝膠），使蛋白質(zhì)按分子量大小分離 ,。
轉(zhuǎn)膜：電泳結(jié)束后,，將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到 PVDF 膜或 NC 膜上，可采用半干轉(zhuǎn)或濕轉(zhuǎn)的方法,，根據(jù)轉(zhuǎn)膜設(shè)備的操作說明設(shè)置參數(shù),，確保蛋白質(zhì)有效轉(zhuǎn)移 。
封閉：將膜放入封閉液中,，室溫振蕩孵育 1 - 2 小時 ,。
一抗孵育：棄去封閉液，用洗滌緩沖液沖洗膜 3 次,，每次 5 分鐘 ,。將膜放入稀釋好的 DFNA5 抗體溶液（推薦稀釋比例 1:500 - 1:2000）中，4℃振蕩孵育過夜 ,。
洗滌：次日,，用洗滌緩沖液沖洗膜 5 次，每次 5 分鐘 ,。
二抗孵育：將膜放入稀釋好的標(biāo)記二抗溶液（如 HRP 標(biāo)記二抗,，稀釋比例 1:2000 - 1:5000）中，室溫振蕩孵育 1 - 2 小時 ,。
檢測：對于 HRP 標(biāo)記的二抗,，使用化學(xué)發(fā)光試劑盒進行檢測，將膜與發(fā)光底物孵育后,，在化學(xué)發(fā)光成像儀上曝光成像,，分析蛋白條帶 。
抗體保存：實驗結(jié)束后,，將剩余抗體短暫離心,，按照要求保存于 - 20℃冰箱 。避免反復(fù)凍融,，若需多次使用,，可將抗體分裝成小份，每次使用一份,，減少對抗體活性的影響,。
廢棄物處理：實驗過程中產(chǎn)生的廢棄物，如含有抗體、樣品的液體以及使用過的耗材等,，應(yīng)按照實驗室生物安全和化學(xué)廢棄物處理規(guī)定進行分類處理 ,。對于含有放射性或有毒有害試劑的廢棄物，需特殊處理,，確保不對環(huán)境和人員造成危害,。
抗體保存與使用：嚴格按照推薦的溫度保存抗體，避免溫度波動 ,。從冰箱取出抗體后,，應(yīng)在冰上融化，待恢復(fù)至室溫后再使用,，防止因溫度變化導(dǎo)致抗體失活,。使用前務(wù)必短暫離心，確?？贵w全部集中于管底,，避免移液誤差。
樣品處理：在樣品制備過程中,，要注意保持抗原的完整性和活性 ,。避免使用過強的裂解條件導(dǎo)致蛋白降解，同時防止樣品污染,。對于組織樣品,，固定和包埋過程要及時、規(guī)范,，確?？乖砦徊槐黄茐摹?/span>
實驗條件優(yōu)化：不同的實驗樣本和實驗?zāi)康目赡苄枰煌目贵w稀釋比例和孵育條件 ,。在正式實驗前,，建議進行預(yù)實驗，摸索最佳的實驗條件,，如抗體稀釋度,、孵育時間和溫度等，以獲得理想的實驗結(jié)果,。
二抗選擇：根據(jù)一抗的來源種屬和標(biāo)記方式,，選擇合適的二抗 。確保二抗與一抗能夠特異性結(jié)合,，且標(biāo)記物（如熒光基團,、HRP 等）與檢測方法相匹配,。同時,，注意二抗的稀釋比例，過高或過低的稀釋比例都可能影響檢測效果,。
安全防護：實驗過程中使用的試劑,，如多聚甲醛,、Triton X - 100、DAB 等具有一定的毒性或刺激性 ,。操作時需佩戴手套,、護目鏡等防護裝備，在通風(fēng)櫥中進行,，避免試劑接觸皮膚和吸入人體,。實驗結(jié)束后，及時清洗實驗器材和操作臺,，保持實驗室環(huán)境整潔安全,。
無特異性條帶（免疫印跡）：
原因：可能是抗體稀釋比例過高、一抗或二抗孵育時間不足,、轉(zhuǎn)膜不充分,、樣品中目的蛋白含量過低等 。
解決方法：降低抗體稀釋比例,，重新進行實驗,；延長一抗和二抗的孵育時間；檢查轉(zhuǎn)膜條件,，優(yōu)化轉(zhuǎn)膜參數(shù),，確保蛋白質(zhì)有效轉(zhuǎn)移；增加上樣量或?qū)悠愤M行濃縮處理,，提高目的蛋白含量 ,。
背景信號過高（免疫組化 / 免疫熒光）：
原因：封閉不充分、抗體濃度過高,、洗滌,、二抗非特異性結(jié)合等 。
解決方法：延長封閉時間或更換封閉液,；降低抗體稀釋比例,；增加洗滌次數(shù)和時間，確保充分洗去未結(jié)合的抗體,；選擇特異性更高的二抗,，或降低二抗?jié)舛?。
熒光信號弱（免疫熒光）：
原因：抗體濃度過低,、孵育時間不足,、熒光淬滅、激發(fā)波長選擇錯誤等 ,。
解決方法：提高抗體稀釋比例,；延長一抗和二抗的孵育時間；使用抗熒光淬滅封片劑，避免熒光信號淬滅,；檢查熒光顯微鏡的激發(fā)波長設(shè)置,，確保與熒光標(biāo)記二抗的激發(fā)波長匹配
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