Zeta Life Advanced DNA/RNA 轉(zhuǎn)染試劑攻克 RAW264.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率難題

RAW264.7細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實(shí)驗(yàn)者的一道難題,，特別對(duì)于比較大的質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難；我們實(shí)驗(yàn)室用美國(guó)Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號(hào)AD600075轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞整理了一套優(yōu)化方案希望對(duì)大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助,。

 下圖是用美國(guó)Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號(hào)AD600150在6孔板轉(zhuǎn)8000bp左右的pEGFP-C1r到RAW264.7細(xì)胞的熒光和細(xì)胞明場(chǎng)圖片,。

提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞條件如下

一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1,、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水,；②無(wú)內(nèi)毒素），我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二,、操作流程

1,、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞匯合度在70%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced DNA RNA貨號(hào)AD600075轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合,，用移液器吹吸10-15次混勻,，室溫靜止10-15分鐘,。

3、將復(fù)合物加入wan全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板,，并輕輕混勻,，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無(wú)血清的培養(yǎng)基里面，我后期會(huì)進(jìn)一步摸索此條件）,。

4,、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

5,、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率

三,、注意事項(xiàng)：

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6,、FuGENE HD,、Effectene等；

2細(xì)胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,，Gibco公司DMEM;

四,、美國(guó)Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：