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慢病毒背景
慢病毒載體（Lentiviral vectors, LVs）是在人免疫缺陷病毒HIV-1的基礎(chǔ)上改造而來的,，可以將大量的遺傳信息傳遞進(jìn)宿主細(xì)胞，并且整合到細(xì)胞的基因組內(nèi),，使其可以在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)若干代,。同時，由于它的毒力基因已經(jīng)被剔除,，作為假病毒可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)較為安全的使用,。慢病毒載體可以轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞,，包含原代細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
慢病毒在Car-T細(xì)胞療法中的應(yīng)用
基于慢病毒具有：
感染范圍廣,、效率高，有效感染分裂和非分裂的細(xì)胞,；
穩(wěn)定性強(qiáng),，整合進(jìn)基因組中，長期穩(wěn)定表達(dá)外源的基因,；
免疫原性低,，安全性相對較高的特點(diǎn)，慢病毒被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞治療中,。
CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-cell,，嵌合抗原受體T細(xì)胞）療法是一種突破性免疫療法，通過基因改造患者的T細(xì)胞,，使其表達(dá)特定的CAR（嵌合抗原受體）,，從而識別并殺傷腫瘤細(xì)胞。目前主要用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤（如B細(xì)胞白血病,、淋巴瘤）,，并逐步向?qū)嶓w瘤拓展。
慢病毒整合的特性
慢病毒是目前CAR-T主流轉(zhuǎn)導(dǎo)方式（FDA已批準(zhǔn)的CAR-T產(chǎn)品中,，約90%采用LV）,，慢病毒整合在細(xì)胞內(nèi)是半隨機(jī)整合（偏好轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)）。
1
慢病毒通過識別宿主表面受體,，把RNA和蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至胞內(nèi),；
2
病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄形成線性 雙鏈cDNA（含兩端LTR序列）
3
整合酶識別LTR,cDNA被整合到宿主基因組中；
4
外源基因隨宿主細(xì)胞分裂持續(xù)表達(dá),。
整合偏好性：
整合位點(diǎn)分析（Integration Site Analysis, ISA）是基因治療產(chǎn)品（如CAR-T）臨床開發(fā)和上市后監(jiān)測的關(guān)鍵環(huán)節(jié),，其法規(guī)要求由各國監(jiān)管機(jī)構(gòu)（如FDA、EMA）制定,，旨在評估基因組整合的潛在風(fēng)險（如插入突變,、克隆擴(kuò)增）。
目前檢測ISA的方法有LM-PCR,、NGS,、單細(xì)胞測序等，為了保證檢測的準(zhǔn)確性,，科佰生物開發(fā)了一系列慢病毒整合位點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品供檢測機(jī)構(gòu)使用,，作為品質(zhì)衡量的標(biāo)尺對檢測能力進(jìn)行判別。在前文 慢病毒整合位點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品強(qiáng)勢來襲一文中,，已對單克隆多插入位點(diǎn),、單克隆單插入位點(diǎn),、性染色體插入位點(diǎn) 做了產(chǎn)品的說明及數(shù)據(jù)展示。近期科佰推出了5% 2% 整合頻率的慢病毒多克隆多整合位點(diǎn)參考品,，由多個單克隆整合位點(diǎn)產(chǎn)品混合而來,，覆蓋20個插入位點(diǎn)，分別來自11個不同染色體上的20個基因,，如下表所示
Figure 1. 基因分布
Figure 2. 染色體分布
每個位點(diǎn)經(jīng)過LM-PCR（用于識別已知DNA與相鄰未知DNA的一種技術(shù),，可結(jié)合NGS，對IS進(jìn)行高通量分析）,、 NGS（捕獲探針法測序）技術(shù)檢測,，Sanger測序驗(yàn)證，以及dPCR檢測定標(biāo)整合頻率,，確保插入位點(diǎn)的準(zhǔn)確定位和整合頻率的精準(zhǔn)測量,。
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如果您對我們的慢病毒多整合位點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品感興趣，或希望了解更多信息,，請聯(lián)系我們的銷售團(tuán)隊(duì),。我們將竭誠為您提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)，助力您的實(shí)驗(yàn)室實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn),、更高效的檢測,。
產(chǎn)品列表
貨號 | 名稱 |
CBPL0007 | 慢病毒多克隆多整合位點(diǎn)參考品-5% |
CBPL0008 | 慢病毒多克隆多整合位點(diǎn)參考品-2% |
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示：
5% chr3：4871944 ITPR1四種檢測結(jié)果：
LM-PCR結(jié)果
NGS結(jié)果
Sanger結(jié)果
3'LTR+ITPR1 chr3_4871940
ITPR1 chr3_4871944+5'LTR
dPCR結(jié)果
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