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色譜柱柱壓過(guò)高是液相色譜(HPLC/UHPLC)分析中常見(jiàn)的問(wèn)題,，可能由流動(dòng)相,、系統(tǒng)堵塞、色譜柱污染或儀器故障引起,。平時(shí)我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室進(jìn)行液相色譜的分析測(cè)試時(shí),，如果突然遇到色譜柱柱壓過(guò)高，需要怎么做,？
01立即采取的安全措施
停止運(yùn)行儀器
關(guān)閉泵和檢測(cè)器,，避免持續(xù)高壓損壞系統(tǒng)。
佩戴防護(hù)裝備
處理高壓系統(tǒng)時(shí)需戴護(hù)目鏡和手套,，防止液體噴濺,。
02逐步排查原因及解決方法
柱壓過(guò)高的核心排查邏輯：從外到內(nèi)，由簡(jiǎn)到繁,。優(yōu)先排除流動(dòng)相,、過(guò)濾器和保護(hù)柱等外部因素，再逐步深入檢查儀器部件和色譜柱,。定期維護(hù)和規(guī)范操作是預(yù)防高壓?jiǎn)栴}的關(guān)鍵,。
流動(dòng)相
◆有無(wú)充分脫氣？
觀察流動(dòng)相瓶里是否有很多氣泡,，氣泡堵塞濾頭會(huì)導(dǎo)致壓力升高,，可重新超聲流動(dòng)相或者重新配置流動(dòng)相。
◆流動(dòng)相是否澄清？是否分層,？或者有顆粒物析出,？
建議流動(dòng)相使用前用濾膜過(guò)濾，一般使用0.22μm濾膜過(guò)濾有機(jī)相,，0.45μm濾膜過(guò)濾水相或緩沖鹽,，防止有鹽的顆粒堵塞管線或者色譜柱導(dǎo)致壓力升高。如看到流動(dòng)相渾濁或分層,，需重新配置,。
如果有鹽溶液，超純水溶解緩沖鹽后,，再加入有機(jī)相,，加入后，需擰緊瓶蓋,，大力搖勻,，僅僅超聲是不夠的，需要做到充分混勻,，防止水相和有機(jī)相未混勻?qū)е碌某龇瀹惓,；虿怀龇迩闆r。
斷開(kāi)色譜柱,，排查儀器壓力
◆卸下色譜柱,，用兩通接頭連接泵與檢測(cè)器，以純甲醇/乙腈(低黏度)運(yùn)行系統(tǒng),。
◆正常壓力：<5 MPa(不同儀器基線值可能略有差異)
◆高壓持續(xù)：說(shuō)明泵,、混合器、管路或檢測(cè)器堵塞,，需分段檢查,。
連接保護(hù)柱
◆若系統(tǒng)壓力正常，依次連接保護(hù)柱,、色譜柱,，判斷壓力升高的來(lái)源。
◆保護(hù)柱壓力高：更換保護(hù)柱柱芯,，若更換了保護(hù)柱柱芯壓力仍高,，說(shuō)明是保護(hù)柱柱套堵了，需更換新的柱套,；保護(hù)柱壓力不高,，色譜柱壓力高，說(shuō)明是色譜柱導(dǎo)致的系統(tǒng)壓力高,，再進(jìn)一步排查,。
色譜柱部分
◆首先需要檢查色譜柱的規(guī)格,，例如長(zhǎng)度、內(nèi)徑,、填料粒徑這些參數(shù),，如果粒徑較小且內(nèi)徑較小，需注意此類型色譜柱本身壓力就會(huì)偏高一些,，如果遇到儀器超壓報(bào)警,，關(guān)注是否是儀器耐壓上限低導(dǎo)致的。(ps：各個(gè)系列色譜柱維護(hù)指南,、典型壓力及壓力上限可在艾杰爾飛諾美公眾號(hào)自主查詢)
◆新柱啟用,，如果流動(dòng)相起始比例是高比例的鹽溶液(例90%磷酸二氫鉀緩沖鹽：10%乙腈),，需先用同比例的乙腈水(例90%水：10%乙腈)過(guò)渡,，防止高比例有機(jī)相立馬轉(zhuǎn)換到高比例鹽溶液造成的鹽析現(xiàn)象。
◆色譜柱使用一段時(shí)間后導(dǎo)致的壓力升高：如果柱壓緩慢升高,，且伴隨峰形展寬或分叉,，柱效明顯下降----篩板或柱頭堵塞；如果柱壓驟升-----填料塌陷,。
一般建議反向沖洗色譜柱,，使用適當(dāng)溶劑梯度沖洗，嚴(yán)重污染時(shí),，可嘗試強(qiáng)溶劑沖洗,；填料塌陷需更換色譜柱；也可反接色譜柱使用看壓力是否符合要求,。(具體的沖洗流程各個(gè)色譜柱不盡相同,，可在艾杰爾飛諾美公眾號(hào)自主查詢)
03其他可能原因
溫度異常
◆柱溫過(guò)低導(dǎo)致流動(dòng)相黏度升高，壓力升高,，適當(dāng)提高柱溫(需參考方法要求及色譜柱耐溫上限要求),。
◆溫控模塊故障需檢修。
流速設(shè)置錯(cuò)誤
檢查方法中流速是否超出色譜柱耐受范圍(如常規(guī)液相色譜柱通常≤1.5 mL/min),。
樣品殘留
未過(guò)濾樣品(0.22μm濾膜)或高濃度樣品導(dǎo)致柱頭污染,，需加強(qiáng)樣品前處理。
04預(yù)防措施及日常維護(hù)
1,、使用合適的保護(hù)柱,，定期更換保護(hù)柱柱芯。
2,、緩沖鹽流動(dòng)相,，色譜柱活化需先用高比例水相過(guò)渡，避免鹽析現(xiàn)象,。
3,、色譜柱沖洗及保存：常規(guī)反相柱,，需先用高比例水相沖洗，再用高比例有機(jī)相沖洗,，然后高比例有機(jī)相保存,。需要注意清洗時(shí)，將流速設(shè)置為低于方法流速,，長(zhǎng)時(shí)間沖洗比多次沖洗的效果好,。
4、利用固相萃取(Strata-X/Cleanert SPE產(chǎn)品)等樣品制備技術(shù)或配件(Phenex/Clarinert針頭式過(guò)濾器),，盡可能減少進(jìn)入系統(tǒng)和色譜柱上的污染物,。
5、不要讓色譜柱過(guò)載,，進(jìn)樣合適的樣品濃度和體積,。
6、記錄壓力基線,，記錄新色譜柱初始?jí)毫?，便于后續(xù)對(duì)比判斷。
下面來(lái)總結(jié)一下：
色譜柱壓力過(guò)高的一般排查順序?yàn)?，先排查流?dòng)相,，再連接兩通排查儀器及系統(tǒng)壓力，最后排查保護(hù)柱及色譜柱,，同時(shí)需要查看溫度及流速的設(shè)置以及是否色譜柱規(guī)格與儀器壓力上限不合適的情況,。若自行處理無(wú)效，建議聯(lián)系儀器或色譜柱廠家尋求技術(shù)支持,。
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