基質(zhì)膠應(yīng)用(1) —皮下成瘤實驗全攻略

來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2025年05月28日 08:26

導(dǎo) 語

想評估抗癌藥物療效,？研究腫瘤生長機制？皮下成瘤實驗是腫瘤研究中的經(jīng)典模型,！但如何規(guī)范操作確保實驗成功率,？需要哪些關(guān)鍵試劑,？本文為您一一解析！

PART.01

皮下成瘤實驗

皮下成瘤（Subcutaneous Tumorigenesis）是將腫瘤細胞接種到小鼠皮下,，模擬腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ?。因其操作簡便、成瘤周期短,、可視化強，被廣泛用于：

? 抗腫瘤藥物療效評價,；

? 腫瘤發(fā)生機制研究,；

? 免疫治療及基因治療開發(fā)。

PART.02

實驗步驟

準備對數(shù)期生長的,、細胞密度達80 - 90%左右的HepG2細胞,，于收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

胰酶消化細胞,，待細胞變圓未脫離培養(yǎng)皿時,，去除胰酶，加入PBS/無血清培養(yǎng)基制成細胞懸液,，離心清洗一次,，重懸至終濃度為1×10⁸個細胞/mL。

將細胞懸液和Ceturegel™高濃度基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例進行稀釋,，制備成終濃度為5×10⁷個細胞/mL（Ceturegel™基礎(chǔ)濃度基質(zhì)膠建議濃度在70%以上）,。

左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩處皮下注射,，接種時,，針頭在皮下進針深一點，約1 cm深,，以減少注射后細胞懸液從針眼溢出,，接種體積為200 μL。(這一過程盡量在半小時內(nèi)完成,，途中細胞懸液放在冰上以減緩細胞凋亡及防止出現(xiàn)凝膠現(xiàn)象）,。

將裸鼠放回籠內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)，1周~1月左右可看到腫瘤出現(xiàn),，并根據(jù)實驗設(shè)計在腫瘤體積達到要求時對裸鼠進行安樂si,，并拍照。

PART.03

實驗結(jié)果

圖.HepG2裸鼠成瘤實驗

PART.04

常見問題及解答

常見的荷瘤不成功可能的原因,？

① 細胞的狀態(tài)是成瘤實驗的關(guān)鍵,，所以細胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數(shù)生長期的細胞,，細胞達 80 - 90% 左右密度為宜,，收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基,。
② 可能是小鼠周齡太大，一般選擇 4 - 6 周齡裸鼠,，小于 4 周可能不耐受過早死亡,，大于 6 周免疫力會增強，不易成瘤,。
③ 可能是小鼠免疫排斥,，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
④ 接種部位也是成瘤實驗的重要因素,。選擇血管豐富且易操作的部位接種,，如腋下、腹股溝,、側(cè)腹部及頸背部等部位,，其中腋下中后部皮下較好，成瘤率高,，比較推薦打腋下,，一人操作很方便，后續(xù)量瘤子也很好操作,。

腫瘤長起來后又消失的原因,？

腫瘤生長過程中，如果出現(xiàn)腫瘤塊先縮小,，后變大的現(xiàn)象,，很可能是由于炎癥反應(yīng)，腫瘤細胞被小鼠自身吸收造成的,。繼續(xù)觀察腫瘤細胞吸收之后是否經(jīng)過幾周還能長出來,，如若后續(xù)腫瘤依舊未長出來，可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠,。

PART.05

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠	40183ES	1.5 mL/5 mL/10 mL
Ceturegel® Matrix High Concentration,，LDEV-Free基質(zhì)膠	40187ES	1.5 mL/5 mL/10 mL
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液（0.25%），含酚紅	40126ES	100 mL
PBS(1×)細胞培養(yǎng)級	41403ES	500 mL

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