上海泛柯人β-防御素3（HβD-3elisa試劑盒操作步驟操作步驟：
　　
　　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
　　
　　1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,，4℃過夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡稱洗滌,，下同）。
　　
　　2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時,。然后洗滌,。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）,。
　　
　　3.加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時,，洗滌,。
　　
　　4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。
　　
　　5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
　　
　　6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。
　　
　　用于檢測未知抗體的間接法：
　　
　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,，每孔加0.1ml,，4℃過夜。次日洗滌3次,。
　　
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　　加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
　　
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　　于反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。
　　
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　　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。
　　
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　　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
　　
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　　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
　　
　　器材:
　　
　　（1）聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔,，ELISA檢測儀,，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭,，小毛巾,，洗滌瓶。
　　
　?。?）小燒杯,、玻璃棒、試管,、吸管和量筒等,。
　　
　　（3）4℃冰箱,，37℃孵育箱,。
　　
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