胞漿蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：26161

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取胞質(zhì)蛋白,，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,，作用較為溫和,，可獲得蛋白,，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑,，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究,。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成：

操作步驟:

1. 組織胞漿蛋白的提取

1) 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑,、蛋白酶抑制劑和PMSF,；混勻，放置在冰上備用,；

2) 稱取0.1g的新鮮組織,，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液,，研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊，這個(gè)過(guò)程注意冰上操作,；

3) 將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,，4℃ 12000g 離心30min；

4) 吸取上清至新的管中,；

5) 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn),。

（提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取,，避免反復(fù)凍融,，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。）

2. 細(xì)胞胞漿蛋白的提取

1) 裂解液的用量：10⁷個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml,；

2) 貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基,，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS,，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液,；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中,，顛倒裂解20-30min,。

3) 懸浮細(xì)胞：4℃ 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞,，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液,，渦旋10s,，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次,；

4) 裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 ℃12000g 離心30min,；

5) 將上清移入新的EP管中,；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。

（提取好的蛋白建議保存于-80℃,，即用即取,，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存,。）

注意事項(xiàng)：

1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程,，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境,。

2. PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加,，因?yàn)?/span>PMSF在水溶液中會(huì)快速降解。

有效期：至少一年,。