二手羅氏 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR儀系統(tǒng)技術概述

一、引言

隨著分子診斷和基因研究需求的不斷增長,，實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qPCR）技術在科研,、臨床檢測、食品安全,、生物制藥等領域得到了廣泛應用,。PCR儀器作為該技術的核心設備，具有重要作用,。在設備選型中,，部分實驗室選擇使用二手儀器作為過渡或擴容方案，以控制成本并維持實驗效率,。

羅氏（Roche）推出的 LightCycler® 96 是一款廣泛應用于科研和基礎檢測領域的中通量實時熒光定量PCR儀,。其二手設備在功能結構、操作流程等方面基本保持完整,，并在技術指標滿足要求的前提下,，仍可繼續(xù)在標準實驗環(huán)境中發(fā)揮作用。本文將從儀器構造,、功能特點,、使用優(yōu)勢、適用范圍,、選購建議等方面,，全面介紹二手 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR系統(tǒng)。

二,、設備概況

LightCycler® 96 是羅氏分子系統(tǒng)產(chǎn)品線中的一款96孔qPCR平臺,，設計理念偏向通用性和穩(wěn)定性，適用于中小規(guī)模實驗室的日?；蚨咳蝿?。該設備集成了精準溫控系統(tǒng)、四通道熒光檢測模塊以及數(shù)據(jù)分析平臺,，可支持常見的SYBR Green,、TaqMan探針等反應體系。

主要技術參數(shù)如下：

三,、構造與工作原理

1. 溫控系統(tǒng)

設備采用雙向帕爾貼（Peltier）技術，通過閉環(huán)反饋控制,，確保PCR反應過程中的溫度均一性與重現(xiàn)性,。熱蓋系統(tǒng)自動壓緊,，防止樣品蒸發(fā)，提升反應效率,。

2. 熒光檢測模塊

光學系統(tǒng)具備四個獨立檢測通道,，采用精密濾光片與光電探測器分光讀取熒光強度，可實時監(jiān)控多重擴增反應的熒光信號,，適用于雙通道或多通道實驗設計,。

3. 控制與數(shù)據(jù)分析

配套 LightCycler® 96 軟件支持：

• 擴增曲線和熒光信號的實時可視化；

• Ct值自動判讀,；

• 標準曲線法,、ΔΔCt法、相對/絕對定量分析,；

• 熔解曲線分析,，判斷引物特異性。

四,、二手設備使用價值分析

1. 經(jīng)濟性

二手LightCycler® 96 儀器通常原價50%甚至更多,，對于預算有限的實驗室是一種可行的擴展選擇。若由正規(guī)渠道回收,、翻新并經(jīng)校準檢測，設備仍可提供穩(wěn)定的數(shù)據(jù)輸出,。

2. 適用性

二手設備在功能模塊完整,、光學系統(tǒng)正常、溫控系統(tǒng)穩(wěn)定的前提下,，可應用于以下任務：

• RNA逆轉錄后的基因表達定量,；

• 病原體DNA/RNA的檢測；

• 突變篩查與多態(tài)性分析,；

• 食品和水質中污染物的分子檢測,；

• 藥物代謝基因分型研究。

3. 軟件兼容性

配套軟件無需訂閱費用,，支持在主流Windows操作系統(tǒng)下運行,，兼容xlsx、csv,、txt等格式數(shù)據(jù)導出,，便于進一步統(tǒng)計分析或整合到LIMS系統(tǒng)中。

五,、二手設備選購與使用注意事項

1. 購買渠道與檢測報告

建議通過有資質的實驗設備供應商采購,，要求提供設備來源、校準報告,、檢測報告,、功能測試記錄,，以及操作說明書等完整資料。避免通過非正規(guī)途徑購入未經(jīng)檢測的設備,，存在數(shù)據(jù)不穩(wěn)定或電氣故障等隱患,。

2. 外觀與結構檢查

• 儀器應無明顯磕碰或變形；

• 內(nèi)部托盤無銹蝕或污染,；

• 光路模塊無損壞,、無灰塵遮蔽；

• 顯示屏,、端口,、按鈕正常運行。

3. 功能測試建議

建議進行以下項目測試：

• 各通道熒光采集準確性,；

• 溫度梯度測試（96孔溫控均勻性）,；

• 實驗復現(xiàn)性測試（3次重復反應Ct值標準差≤0.2）；

• 軟件運行穩(wěn)定性,。

4. 易損件更換與保養(yǎng)

常見易損件包括熱蓋密封圈,、光源模塊,、風扇等,。建議定期檢查并更換,，以延長設備使用壽命。設備應在通風干燥環(huán)境中使用,，避免強光,、濕氣、高溫影響,。

六,、典型應用實例

1. 科研實驗室

某高校生命科學實驗室購入一臺二手LightCycler® 96用于課題組日?；虮磉_檢測。經(jīng)過校準后,，該設備可穩(wěn)定運行,，配合自制SYBR體系完成對植物轉基因株系的篩選與分析。

2. 醫(yī)院檢驗科

在病原體篩查方面,，一些社區(qū)醫(yī)院通過采購二手qPCR設備構建初步檢測能力,，對常見呼吸道病毒、HPV,、人類皰疹病毒等進行初篩,，隨后送樣至上級醫(yī)院進一步確診,。

3. 食品企業(yè)質控實驗室

某食品企業(yè)為檢測成品中是否存在非法添加物質（如動物源成分、轉基因成分）,，購置了二手LightCycler® 96 配合商業(yè)試劑盒，開展日常抽檢和留樣復測,。

七,、常見問題與解決方案

八、發(fā)展趨勢與選型建議

隨著數(shù)字PCR,、微流控PCR等新技術的發(fā)展,，傳統(tǒng)qPCR平臺逐漸融合更多自動化與微型化元素。然而,，在預算有限,、應用任務穩(wěn)定的實驗場景中，二手LightCycler® 96 仍具備實用價值,。建議在以下情況下考慮采購：

• 實驗室為教學或科研用途,，對通量要求不高；

• 僅用于標準化重復實驗,，不涉及高通量篩查,；

• 可配合已有反應體系與試劑平臺，形成閉環(huán)工作流程,。

九、總結

二手羅氏 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR儀作為一款技術成熟,、操作簡便的中通量qPCR平臺,，若維護得當，仍可在常規(guī)分子生物學研究及基礎檢測中發(fā)揮良好作用,。對于實驗室預算有限,、檢測需求明確的單位，合理選購并科學使用二手設備,，是提升實驗效能,、優(yōu)化資源配置的一種現(xiàn)實路徑。