電泳儀的操作步驟中,，處理樣品時有哪些注意事項,？

樣品的收集與保存

• 保持生物活性：如果樣品是生物組織或細胞中的蛋白質,、核酸等生物大分子,，在收集過程中要盡量保持其生物活性，避免使用過熱,、過酸,、過堿等可能導致生物大分子變性的條件。例如,，在提取蛋白質時,，要在低溫環(huán)境下進行，并加入蛋白酶抑制劑,，防止蛋白質被降解,。

• 防止核酸酶污染：對于核酸樣品，要特別注意防止核酸酶的污染,，因為核酸酶會降解核酸,。所有用于核酸處理的試劑和器材都要經過嚴格的滅菌處理，并且要避免樣品與手指等可能帶有核酸酶的物體接觸,。

• 合適的保存條件：收集到的樣品若不能立即進行電泳分析,，需要根據樣品的性質選擇合適的保存條件。一般來說,，蛋白質樣品可以在 - 20℃或 - 80℃下冷凍保存,，但要注意避免反復凍融，以免蛋白質變性,；核酸樣品則可以在 - 20℃保存,，對于長期保存的 DNA 樣品，也可以加入適量的無水乙醇,，在 - 80℃下保存,。

樣品的溶解與稀釋

• 選擇合適的溶劑：根據樣品的性質選擇合適的溶劑來溶解樣品。對于蛋白質樣品,，常用的溶劑有 Tris - HCl 緩沖液,、PBS 緩沖液等，并且要根據蛋白質的等電點調整緩沖液的 pH 值，使蛋白質能夠充分溶解并帶上適當的電荷,。對于核酸樣品,，一般使用 TE 緩沖液（Tris - EDTA 緩沖液）來溶解，EDTA 的作用是螯合金屬離子,，防止核酸酶對核酸的降解,。

• 控制濃度：樣品的濃度要適中,，過濃的樣品可能導致電泳條帶拖尾,、變形或分辨率降低，過稀的樣品則可能無法檢測到清晰的條帶,。在進行電泳之前,，需要通過定量分析方法（如蛋白質定量的 Bradford 法、BCA 法,，核酸定量的紫外分光光度法等）準確測定樣品的濃度,，并根據實驗要求進行適當的稀釋。

加入緩沖液和添加劑

• 緩沖液的選擇：加入的緩沖液要與電泳緩沖液相匹配,，以保證在電泳過程中樣品所處的環(huán)境 pH 值穩(wěn)定,。不同的電泳體系需要使用不同的緩沖液，如 SDS - PAGE 電泳常用 Tris - 甘氨酸緩沖液,，而等電聚焦電泳則需要使用專門的兩性電解質緩沖液,。

• 添加劑的使用：根據實驗目的，可能需要在樣品中加入一些添加劑,。例如,，在蛋白質 SDS - PAGE 電泳中，需要加入十二烷基硫酸鈉（SDS）和 β - 巰基乙醇等,。SDS 可以使蛋白質變性并帶上負電荷,，β - 巰基乙醇則可以還原蛋白質中的二硫鍵，使蛋白質亞基充分分離,。在核酸電泳中,，有時會加入溴化乙錠（EB）等染料，以便在電泳后能夠通過紫外光照射觀察核酸條帶,，但要注意 EB 是一種強致癌物質,，使用時需小心操作并做好防護。

混合與離心

• 充分混合：加入緩沖液和添加劑后,，要充分混合樣品,，使樣品中的成分均勻分布?？梢允褂脺u旋振蕩器或移液器反復吹打等方法進行混合,，但要注意避免產生過多的氣泡，以免影響后續(xù)的加樣操作。

• 離心處理：混合后的樣品一般需要進行離心處理,，以去除可能存在的不溶性雜質或氣泡,。離心速度和時間根據樣品的性質和體積而定，一般蛋白質樣品可以在 10000 - 15000rpm 下離心 5 - 10 分鐘,，核酸樣品則可以在較低的速度下（如 5000 - 8000rpm）離心 3 - 5 分鐘,。離心后的樣品取上清液用于電泳加樣