用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片需要抗原修復(fù):
福爾馬林固定的組織有可能破壞了原來組織的抗原結(jié)構(gòu),,蛋白多肽發(fā)生交聯(lián),,導(dǎo)致部分抗原表位封閉,結(jié)合位點(diǎn)減少,,所以需要抗原修復(fù),,以暴露原來的抗原表位,達(dá)到充分顯露抗原,,以不出現(xiàn)明顯脫片現(xiàn)象為佳,。
抗原修復(fù)的幾種常用方法:(供參考)
1. 微波爐加熱:在微波爐里加熱0.01枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)至沸騰后將組織芯片放入,斷電,間隔5-10分鐘,,反復(fù)1-2次,。
適用的抗原:來源于人、大鼠,、小鼠的組織標(biāo)本,;來源于其他動物種屬的組織標(biāo)本:
Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.
ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等
2. 高壓熱修復(fù):在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01m枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0).蓋上不銹鋼鍋蓋,但不能鎖定,。將玻片置于金屬染色架上,,緩慢加壓,使玻片在緩沖液中浸泡五分鐘,,然后將蓋子鎖定,,小閥門將會升起來。10分鐘后除去熱源,,置入涼水中,,當(dāng)小閥門沉下去后打開蓋子。此方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復(fù),。(骨及軟骨組織的標(biāo)本選擇較溫和的微波加熱修復(fù))
3. 沸熱修復(fù): 電爐或水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)至95℃左右,放入組織芯片加熱10-15分鐘,。
4. 酶消化方法:
常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液,。胰蛋白酶使用前預(yù)熱37℃,消化時(shí)間約為5-30分鐘,。適用于被固定遮蔽的抗原:包括 Collagen.GFAP. Complement.Cytokeratin.c-erB-2.LCA.LN.等
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