支原體QPCR檢測，三復(fù)孔重復(fù)性不好的原因？

來源：上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司 2025年05月22日 15:15

復(fù)孔重復(fù)性不好,，可能有以下幾種原因：

首先，判斷各個參數(shù)設(shè)置是否正確,，例如是否扣除ROX（ABI系列機器）、基線和閾值線等,；

其次,，判斷內(nèi)參通道是否異常，判斷PCR反應(yīng)是否正常進行,；

第三，CT值是否落在35之后,，這是熒光定量PCR反應(yīng)的灰區(qū),，在這個區(qū)間的CT值重復(fù)性非常差,；

第四,，試劑盒本身問題，酶,、引物探針,、反應(yīng)條件等優(yōu)化不完善；

第五,，加樣誤差,；

第六，儀器長時間未校準(zhǔn),。

針對這幾種原因,，進行逐一排查

第一種情況，排查各類參數(shù)設(shè)置,，看看是否能夠解決問題；

第二種情況,，如確實內(nèi)參通道CT值異常,，明顯偏離說明書設(shè)定的范圍，則樣本中存在PCR抑制成分,，需稀釋10倍或抽提核酸進行檢測；

第三種情況，需依據(jù)擴增曲線是否具備典型的S型來判斷,，如兩次檢測均具備典型的S型擴增曲線，則判為支原體陽性,，樣本發(fā)生了極其微弱的支原體污染,；反之，則應(yīng)為支原體陰性,。

第四種情況，需要重新優(yōu)化試劑盒,。

第五種情況,，建議移液器定期校準(zhǔn)，使用時規(guī)范操作,。

第六種情況，儀器要定期校準(zhǔn),。

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