程序降溫儀通過精確控制降溫速率,,避免生物樣本在冷凍過程中因冰晶損傷或滲透壓變化而失活,。以下是其實現(xiàn)冷凍保存的具體步驟及關鍵技術要點:
一、程序降溫儀冷凍保存的核心原理:
低溫保護劑預處理:
使用滲透性保護劑和非滲透性保護劑,減少冰晶形成并穩(wěn)定細胞內(nèi)滲透壓,。
可控降溫速率:
通過降溫儀設定多階段降溫程序,避免快速冷卻導致胞內(nèi)冰晶損傷或慢速冷卻引起溶液效應.
低溫儲存:
最終將樣本轉(zhuǎn)移至液氮或超低溫冰箱長期保存,。
二、程序降溫儀具體操作步驟:
1. 樣本準備與加載
平衡滲透壓:
將生物樣本與冷凍保護劑逐步混合,,室溫下緩慢平衡,避免滲透休克,。
分裝與標記:
將樣本分裝至無菌凍存管或麥管(避免過多液體導致降溫不均),標記名稱,、濃度,、日期等信息。
2. 程序降溫儀設置
選擇預設程序:
根據(jù)樣本類型選擇標準程序,或自定義多階段降溫參數(shù).
傳感器校準:
確保凍存管與降溫儀探頭直接接觸(如插入專用樣品架),,實時監(jiān)控溫度變化,。
3. 降溫執(zhí)行與監(jiān)控
啟動程序:
將裝載樣本的凍存管放入降溫儀樣品槽,啟動程序后自動按設定速率降溫,。
關鍵參數(shù)記錄:
實時記錄溫度曲線,、降溫速率及樣本狀態(tài)(部分高*設備配備可視化攝像頭)。
避免溫差突變:
確保凍存管與降溫儀接觸緊密,,避免因空氣間隙導致局部過冷或升溫,。
4. 超低溫儲存
液氮冷凍:
降溫至-40℃以下后,迅速將樣本浸入液氮(或液氮蒸汽相),,避免冰晶再生長,。
長期存儲:
將樣本轉(zhuǎn)移至液氮罐或-80℃冰箱,定期補充液氮并監(jiān)控溫度穩(wěn)定性,。
5. 復蘇驗證
快速解凍:
從液氮中取出樣本后,,立即置于37~40℃水浴中快速搖晃解凍(防止冰晶形成)。
活性檢測:
通過臺盼藍染色,、流式細胞術或培養(yǎng)法驗證細胞存活率,。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內(nèi)使用,,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任,。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權等問題,,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利,。