Gibco 10744019 成分確定的角質形成細胞無血清培養(yǎng)基用戶指南

一,、產品概述

Gibco 10744019 成分確定的角質形成細胞無血清培養(yǎng)基（Defined Keratinocyte-SFM, DKSFM）是一款專為人類角質形成細胞（Keratinocytes）體外培養(yǎng)設計的無血清培養(yǎng)基。該產品通過化學限定配方替代傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基,，避免批次差異和動物源性成分的潛在風險,，廣泛應用于皮膚生物學、再生醫(yī)學,、藥物篩選及化妝品研發(fā)等領域,。

二、產品特點

1. 化學限定配方

• 所有成分明確且濃度固定,，消除傳統(tǒng)血清培養(yǎng)基中批次差異和未知成分的干擾,，確保實驗結果的可重復性。

• 不含牛垂體提取物（BPE）,，通過生長促進劑替代其功能,，維持細胞形態(tài)和生理標志物穩(wěn)定性。

2. 無血清優(yōu)勢

• 避免血清來源的倫理問題和污染風險（如支原體,、病毒,、內毒素）,。

• 降低實驗變量，提升數(shù)據(jù)準確性,，尤其適用于藥物篩選和毒性測試,。

3. 優(yōu)化細胞增殖與分化

• 鈣濃度低于0.1 mM，支持高密度未分化角質形成細胞的分離和擴增,。

• 配方可抑制成纖維細胞增殖,，確保角質形成細胞的純度。

4. 標準化生產

• Gibco嚴格遵循GMP規(guī)范,，確保每批次培養(yǎng)基成分和性能一致,，滿足高可重復性實驗需求。

三,、技術參數(shù)

• 產品編號：10744019

• 規(guī)格：500 mL（基礎培養(yǎng)基）+ 1 mL（生長添加劑）

• 儲存條件：

• 基礎培養(yǎng)基：2–8°C避光保存

• 生長添加劑：-5至-20°C避光保存

• 完整培養(yǎng)基（混合后）：2–8°C避光保存,，有效期12個月

• 適用細胞類型：人類角質形成細胞、上皮細胞

• 血清水平：無血清

• 添加劑：含谷氨酰胺,、酚紅

• 滅菌方式：無菌過濾

四,、實驗應用指南

（一）實驗準備

1. 試劑準備

• 從冷藏箱中取出基礎培養(yǎng)基，從冷凍箱中取出生長添加劑,，室溫平衡至融化,。

• 在生物安全柜內，將1 mL生長添加劑緩慢加入500 mL基礎培養(yǎng)基中,，輕輕顛倒混勻,，避免產生氣泡。

2. 細胞準備

• 使用胰蛋白酶消化角質形成細胞,，離心收集細胞沉淀,，用新鮮DKSFM重懸細胞。

• 調整細胞密度至推薦范圍（如5×10? cells/cm2）,，接種于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,。

（二）培養(yǎng)條件

1. 溫度與CO?

• 37°C，5% CO?,，飽和濕度環(huán)境,。

• 建議使用Gibco品牌CO?培養(yǎng)箱，確保環(huán)境穩(wěn)定性,。

2. 換液頻率

• 每2–3天更換一次培養(yǎng)基,，觀察細胞生長狀態(tài)。

• 當細胞匯合度達到80%–90%時,，進行傳代,。

（三）傳代操作

1. 消化與收集

• 棄去舊培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞后,，加入適量胰蛋白酶消化細胞,。

• 顯微鏡下觀察細胞變圓后,，加入等體積含血清的培養(yǎng)基終止消化，離心收集細胞,。

2. 接種與培養(yǎng)

• 用新鮮DKSFM重懸細胞,，按1:3–1:5比例傳代至新培養(yǎng)皿中。

• 補充適量培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng),。

五、質量控制與驗證

1. 無菌檢測

• 每批次培養(yǎng)基均通過無菌測試,，確保無細菌、真菌或支原體污染,。

2. 性能驗證

• Gibco對DKSFM進行嚴格的質量控制,，包括細胞增殖率、形態(tài)維持,、標志物表達等指標的驗證,。

• 用戶可通過細胞生長曲線、免疫熒光染色等方法進一步驗證培養(yǎng)基性能,。

3. 法規(guī)合規(guī)

• 該產品已提交主文件至FDA,，符合生物制品生產質量管理規(guī)范（GMP）。

六,、注意事項

1. 儲存與運輸

• 嚴格按照標簽指示儲存,，避免反復凍融。

• 運輸過程中保持冷藏,，確保產品穩(wěn)定性,。

2. 操作安全

• 本產品僅供科研使用，不可用于人體或動物治療,。

• 操作時佩戴手套和護目鏡,，避免接觸皮膚和黏膜。

3. 兼容性

• DKSFM適用于多種角質形成細胞系（如HaCaT,、NHEK）,，但需根據(jù)細胞類型優(yōu)化接種密度和培養(yǎng)條件。

4. 問題處理

• 若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基渾濁,、沉淀或細胞生長異常,，請立即停止使用，并聯(lián)系Gibco技術支持,。

七,、應用案例

1. 皮膚再生研究

• 使用DKSFM培養(yǎng)人類角質形成細胞，構建三維皮膚模型,，評估藥物對皮膚屏障功能的影響,。

2. 藥物篩選

• 在DKSFM中培養(yǎng)原代角質形成細胞,，測試化妝品成分的毒性和刺激性，確保產品安全性,。

3. 腫瘤研究

• 研究角質形成細胞在皮膚癌發(fā)生中的作用,，利用DKSFM維持細胞未分化狀態(tài)，模擬腫瘤微環(huán)境,。