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大鼠卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
大鼠卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
藥品名稱：
通用名：大鼠卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關液體樣本中卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）
含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）水平。用
純化的大鼠卵磷脂膽固醇酰基轉移酶（LCAT）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗
的微孔中依次加入卵磷脂膽固醇酰基轉移酶（LCAT）,，再與HRP 標記的卵磷脂膽固醇?；D
移酶（LCAT）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB 顯
色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺
和樣品中的卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸
光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）濃度。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（360U/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔,，在*、第二孔中分別加標
準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,，再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各
取50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，
濃度分別為240 U/L，160 U/L ,，80 U/L,，40 U/L， 20U/L）,。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣
品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣
2
品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白空調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好
控制在5 分鐘內，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
檢測范圍：
10U/L -300 U/L
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月
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