大鼠卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
大鼠卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
藥品名稱:
通用名:大鼠卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清,,血漿及相關液體樣本中卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)
含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)水平。用
純化的大鼠卵磷脂膽固醇酰基轉移酶(LCAT)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗
的微孔中依次加入卵磷脂膽固醇酰基轉移酶(LCAT),,再與HRP 標記的卵磷脂膽固醇?;D
移酶(LCAT)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經過*洗滌后加底物TMB 顯
色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺
和樣品中的卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸
光度(OD 值),,通過標準曲線計算樣品中大鼠卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)濃度。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品(360U/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10 孔,,在*、第二孔中分別加標
準品100μl,,然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻,;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,
混勻,;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,,再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各
取50μl 分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,
濃度分別為240 U/L,160 U/L ,,80 U/L,,40 U/L, 20U/L),。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、待測樣
品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣
2
品終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30 秒后棄去,如此
重復5 次,,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定:以空白空調零,,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD 值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,,板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間好
控制在5 分鐘內,如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,好做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準,。
檢測范圍:
10U/L -300 U/L
規(guī)格:
96 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃。
2.有效期:6 個月
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