人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基步驟：

細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞,，迅速放入37℃水浴中解凍,。

解凍后,，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布,。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液,。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞,，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片,，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基,。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí),，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,，加入PBS緩沖液漂洗,。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面,。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘,，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后,，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化,。

吹打細(xì)胞使其成為懸液,，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清,，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基,。

做好標(biāo)記,，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存,。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清,。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO）,，輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中,，標(biāo)記后放入程序降溫盒,，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存,。