引言
CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)需高效遞送至細(xì)胞核,，但傳統(tǒng)方法難以實(shí)現(xiàn)時(shí)空精準(zhǔn)控制,。Biotin-PEG-BCN通過生物正交反應(yīng)（如應(yīng)變促進(jìn)的環(huán)加成反應(yīng),，SPAAC），可構(gòu)建響應(yīng)性遞送載體,，為基因治療提供新策略,。

載體設(shè)計(jì)與功能

1. 結(jié)構(gòu)組成：

· Biotin：與鏈霉親和素結(jié)合，實(shí)現(xiàn)載體靶向富集,。

· PEG：提高載體穩(wěn)定性和生物相容性,。

· BCN：通過SPAAC反應(yīng)與疊氮化物修飾的Cas9蛋白/sgRNA復(fù)合物結(jié)合,，形成納米級(jí)遞送系統(tǒng),。

2. 功能優(yōu)化：

· 核定位信號(hào)（NLS）修飾：促進(jìn)載體-基因復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核。

· 光控釋放系統(tǒng)：通過近紅外光觸發(fā)BCN-疊氮鍵斷裂,，實(shí)現(xiàn)時(shí)空精準(zhǔn)釋放,。

在基因編輯中的應(yīng)用

1. 遞送效率評(píng)估：

· 熒光標(biāo)記sgRNA與Biotin-PEG-BCN復(fù)合，通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞轉(zhuǎn)染率,，優(yōu)化N/P比和光照條件,。

2. 脫靶效應(yīng)分析：

· 結(jié)合全基因組測序，比較生物正交遞送組與傳統(tǒng)方法組的脫靶位點(diǎn)頻率,，驗(yàn)證載體安全性,。

案例研究
在杜氏肌營養(yǎng)不良癥（DMD）模型中，Biotin-PEG-BCN遞送的CRISPR/Cas9系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)dystrophin基因的高效修復(fù),，肌肉功能恢復(fù)率達(dá)70%,，顯著優(yōu)于病毒載體組（40%）。

技術(shù)優(yōu)勢

· 精準(zhǔn)可控：生物正交反應(yīng)和光控釋放確?；蚓庉嫷臅r(shí)空精準(zhǔn)性,。

· 低免疫原性：非病毒載體減少免疫反應(yīng)，適用于重復(fù)給藥,。

相關(guān)產(chǎn)品

TCO-PEG3-acid,，CAS:2141981-86-2

TCO-PEG36-acid，反式環(huán)辛烯-三十六聚乙二醇-羧酸

TCO-PEG24-NHS ester,，CAS:2055646-26-7,，反式環(huán)辛烯-二十四聚乙二醇-羥基琥珀酰亞胺酯

TCO-PEG8-amine，CAS:2353409-92-2,，反式環(huán)辛烯-八聚乙二醇-氨基TCO-PEG8-TCO,，CAS:2353409-67-1，反式環(huán)辛烯-八聚乙二醇-反式環(huán)辛烯1-辛炔,，1-SiM alkyne,，CAS號(hào):629-05-0Alkyne tyramide,CAs號(hào):1694495-59-4