蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法：微量凱氏定氮法
　　【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br style="box-sizing: border-box; color: rgba(0, 0, 0, 0.85); font-family: -apple-system, BlinkMacSystemFont, "Apple Color Emoji", "Segoe UI", Roboto, Ubuntu, "Helvetica Neue", Helvetica, Arial, "PingFang SC", "Hiragino Sans GB", "Microsoft YaHei UI", "Microsoft YaHei", "Source Han Sans CN", sans-serif; background-color: rgb(245, 246, 248);"/>　　學(xué)習(xí)凱氏定氮法的原理和操作技術(shù),。
　　微量凱氏定氮法【實(shí)驗(yàn)原理】
　　凱氏定氮法用于測(cè)定有機(jī)物的含氮量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時(shí)，則可用此法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含量,。
　　當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時(shí),，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水,，而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨,，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”,。但是,，這個(gè)反應(yīng)進(jìn)行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)液的沸點(diǎn),，并加入硫酸銅作為催化劑,，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行,。
　　消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿,，可使消化液中的硫酸銨分解,，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法,，將產(chǎn)生的氨蒸餾到量,、濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后,，氨與溶液中氫離子結(jié)合,，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變,，然后用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)鹽酸滴定,，直至恢復(fù)溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量可計(jì)算出待測(cè)物中的總氮量,。
　　蛋白質(zhì)的含氮量為16%,，即1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)，用凱氏定氮法測(cè)出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量,。
　　微量凱氏定氮法【實(shí)驗(yàn)材料】
　　1.實(shí)驗(yàn)器材
　　微量凱氏定氮儀1套,；50ml凱氏燒瓶4個(gè)；移液管,；錐形瓶,；試管；小玻璃珠
　　2.試驗(yàn)試劑
　　(1)濃硫酸,；30％氫氧化鈉溶液,；2％硼酸溶液；標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01mol／L),。
　　(2)粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合,。
　　(3)混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml0.1％甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用,。
　　(4)樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品,。
　　【實(shí)驗(yàn)操作】
　　1.安裝凱氏定氮儀。
　　2.消化：取4個(gè)50ml凱氏燒瓶并標(biāo)號(hào),各加1顆玻璃珠,，在1號(hào)及2號(hào)瓶中各加樣品1ml,，催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200mg，濃硫酸5ml,。注意加樣品時(shí)應(yīng)直接送入瓶底,，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號(hào)及4號(hào)瓶中各加1ml蒸餾水和與1,、2號(hào)瓶相同量的催化劑和濃硫酸,，作為對(duì)照,。在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化。
　　在消化開始時(shí)應(yīng)控制火力,，不要使液體沖到瓶頸,。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力,，繼續(xù)消化,，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力,，冷卻至室溫,。