一,、莢膜

某些細菌生活在一定的營養(yǎng)條件下時,，會在細胞壁表面形成一層松散的粘液狀物質(zhì),，稱為莢膜，一般由多糖和多肽組成,。莢膜能夠保護細胞免遭干燥影響,，同時也是細胞外的碳源和能源的儲備物質(zhì)。當環(huán)境缺乏營養(yǎng)時,，可被細胞利用,。從臨床方面來講莢膜可以保護病原菌免遭宿主吞噬細胞的吞噬，增強其致病能力,。如具有莢膜的S 型肺炎球?qū)θ梭w毒力強,，能引起肺炎，但如果細胞失去莢膜(即成為R型菌株)后,，致病力就下降,。

因莢膜是由細菌細胞壁外的一層粘液性多糖類物質(zhì)組成，其對染料的親和力較弱,，因此不容易著色,，通常采用負染色法進行染色，讓菌體和背景著色,，而莢膜不著色,，從而使菌體周圍呈現(xiàn)透明圈。

莢膜染色方法：

步：需要制作適當厚度的細菌涂片,，涂片時可多挑些菌體與水充分混合,，并將粘稠的菌液盡量涂開，但涂布的面積不宜過大,，在空氣中自然干燥,，不要加熱固定。

第二步：滴加適量的結(jié)晶紫染色液于載玻片上,，覆蓋菌體,，靜置染色5-7分鐘。

第三步：用20%硫酸銅水溶液沖洗涂片,，沖洗要適度,，2-3遍即可。

第四步：用吸水紙吸干多余的水分,，并立刻滴加1-2滴香柏油,，以免形成CuSO4結(jié)晶,。

第五步：使用顯微鏡鏡檢觀察。

二,、鞭毛

鞭毛是生長在細菌菌體表面的細長,、彎曲的，具有運動功能的蛋白質(zhì)附屬物,。鞭毛的數(shù)目大約有一至數(shù)十條,，長度約為15-20μｍ，直徑為0.01-0.02μｍ,。鞭毛是細菌的運動器官,，觀察細菌鞭毛對于細菌鑒定有十分重要的意義。依據(jù)鞭毛的有無,、位置和數(shù)量,，細菌分為無鞭毛菌、單端極鞭毛菌,、單端雙鞭毛菌,、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌,、側(cè)鞭毛菌等,。

一般情況下，因鞭毛較細,，在光學顯微鏡下不易觀察,，通常需使用電鏡進行觀察，但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗,，就可克服上述困難,。

鞭毛染色方法：

步：挑選活力較強的幼齡細菌進行涂片，挑取菌的時候盡量不要帶有培養(yǎng)基,，涂片的玻片必須清洗干凈,，染色前可用洗衣粉洗凈并在酒精中浸泡24h，用前擦拭干凈后使用,。

第二步：將菌落輕點在玻片上,，傾斜玻片讓菌液自然留下，不要用接種環(huán)涂抹或用力過猛,，以免破壞鞭毛,。

第三步：靜置待其自然干燥。

第四步：滴加鞭毛染色液 2-3滴,，在室溫中染色10分鐘,。

第五步：直接用蒸餾水緩慢沖洗染液，不要先傾去染液后再水洗，以免污染背景不易觀察,，沖洗時要將染液的顏色沖洗干凈否則也會影響觀察,。

第六步：使用顯微鏡鏡檢觀察。鏡檢時先從邊緣開始逐漸向中間鏡檢,，因為邊緣處菌量小,，易觀察到單菌落，中心處菌易重疊,，不易觀察,。

三、芽孢

芽胞是芽胞桿菌休眠期的一種特殊形態(tài),。芽胞的形態(tài)包括芽胞形狀,、芽胞位置和胞子囊膨大,，芽胞形態(tài)分為圓柱形,、橢圓形、球形,，芽胞位置分為端生,、近端生、中生或近中生,。具有非常強勁的抗熱,、抗化學藥物、抗輻射性能,。根據(jù)芽胞的形態(tài)學可以對芽胞桿菌屬和梭菌屬進行初步鑒定,。

芽孢壁厚、透性低,，著色,、脫色均較困難。因此,，用著色力強的染色劑(如孔雀石綠)在加熱條件下進行染色時,，染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢,，進入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色,，而進入芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復(fù)染液(如沙黃水溶液)染色后,，芽孢仍然保留初染劑的顏色,，而菌體被染成復(fù)染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區(qū)分,。

芽孢染色方法：

步：常規(guī)涂片,，待干燥后，通過火焰上方3次，進行固定,。

第二步：滴加3-4滴孔雀石綠水溶液于涂片上,。

第三步：用木夾夾住載玻片在火焰上持續(xù)加熱6-8s，使染液冒蒸汽但不沸騰,。

第四步：待玻片冷卻后,，傾去染液，水洗至不再褪色為止,。

第五步：用番紅溶液復(fù)染1min,，水洗至水為無色。

第六步：待其干燥后,，使用顯微鏡鏡檢觀察,。

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