一般來說細胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括：電穿孔法,、顯微注射,、基因槍、磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法,、多種陽離子物質(zhì)介導、病毒介導的轉(zhuǎn)染等,。

01

脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染方法原理

脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具,，已經(jīng)研究的十分廣泛，用合成的陽離子脂類包裹 DNA,，同樣可以通過融合而進入細胞,。

使用脂質(zhì)體將 DNA 帶入不同類型的真核細胞，與其它方法相比,，有較高的效率和較好的重復性,。

中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹 DNA，借助脂質(zhì)膜將 DNA 導入細胞膜內(nèi),。

帶正電的陽離子脂質(zhì)體,，DNA 并沒有預先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的 DNA 自動結合到帶正電的脂質(zhì)體上,，形成 DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物,，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導入細胞,。

02

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的操作步驟

操作步驟：

(1) 細胞培養(yǎng)：取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿),，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 個細胞培養(yǎng)液,，37℃ CO2 培養(yǎng)至 40%～60% 匯合時 (匯合過分，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞),。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在聚苯乙/烯管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)A 液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg DNA,，終量 100μL，B 液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋 2-50 μgLR,，終量 100μL,，輕輕混合 A、B 液,，室溫中置 10-15 分鐘,，稍后會出現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致,，應酌情減量),。

(3) 轉(zhuǎn)染準備：用 2 mL 不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入 1 mL 不含血清培養(yǎng)液,。

(4) 轉(zhuǎn)染：把 A/B 復合物緩緩加入培養(yǎng)液中,，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時,，吸除無血清轉(zhuǎn)染液,，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(5) 其余處理如觀察,、篩選,、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。

注意：轉(zhuǎn)染時切勿加血清,，血清對轉(zhuǎn)染效率有很大影響,。