NK細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法

來源：重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司 2025年05月06日 17:12

NK細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法需結(jié)合細(xì)胞來源,、培養(yǎng)體系及目標(biāo)需求設(shè)計(jì),，核心步驟涵蓋培養(yǎng)基配制、細(xì)胞分離與接種,、動態(tài)培養(yǎng)管理三大模塊,，以下為具體說明：

一、培養(yǎng)基配制與預(yù)處理

基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇

常用RPMI-1640,、DMEM或X-VIVO15等無血清培養(yǎng)基,，需添加5%-10%自體血漿或人AB型血清（滅活處理）。例如,，X-VIVO15培養(yǎng)基中需補(bǔ)充5%血清,，并加入200U/mLIL-2、10ng/mLIL-15及處理的K562細(xì)胞,。

生長因子組合

核心因子包括IL-2（促進(jìn)增殖）,、IL-15（維持存活）、IL-12（增強(qiáng)抗原敏感性）及IL-21（提升細(xì)胞毒性）,。例如,，HER2單抗誘導(dǎo)體系中，需添加1000-2000IU/mLIL-2,、20-40ng/mLIL-12、60-100ng/mLIL-15,、30-60ng/mLIL-18,。

包被處理

培養(yǎng)容器需提前包被抗CD3抗體或HER2單抗（如1-3mg/mL曲妥珠單抗，37℃包被1-2小時）,，以增強(qiáng)細(xì)胞黏附與激活效率,。

二、細(xì)胞分離與接種

外周血來源NK細(xì)胞分離

通過Ficoll密度梯度離心法分離PBMC,，洗滌后重懸于含5%血清的培養(yǎng)基中,，調(diào)整細(xì)胞密度至1×10?cells/mL。

臍帶血來源NK細(xì)胞分選

使用CD34陽性選擇磁珠分離造血干細(xì)胞/祖細(xì)胞,，接種于含20ng/mLSCF,、10ng/mLIL-15,、10ng/mLFLT3L、20ng/mLIL-7的造血干細(xì)胞分化培養(yǎng)基中,，誘導(dǎo)分化為NK細(xì)胞,。

接種密度控制

初始接種密度建議為1.5-2×10?cells/mL，培養(yǎng)體積根據(jù)容器調(diào)整（如T75培養(yǎng)瓶終體積25mL,，細(xì)胞培養(yǎng)袋終體積750-1500mL）,。

三、動態(tài)培養(yǎng)管理

培養(yǎng)條件

溫度37℃,、5%CO?,、飽和濕度，每2-3天更換一半體積培養(yǎng)基,，補(bǔ)充細(xì)胞因子與滅活血漿,。例如，第7天轉(zhuǎn)袋后需加入含1000-2000IU/mLIL-2和20-50ng/mLIL-21的培養(yǎng)基,。

細(xì)胞擴(kuò)增與監(jiān)測

培養(yǎng)14-21天,，期間每2-3天進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)與形態(tài)觀察。第10天后按1.5倍補(bǔ)加培養(yǎng)基,，第14-15天可收獲1×10?-2×10?cells的NK細(xì)胞,。

質(zhì)量控制

培養(yǎng)第13天需檢測細(xì)菌、內(nèi)毒素與支原體,，收獲前通過流式細(xì)胞術(shù)鑒定表型（如CD56?CD3?）,。若增殖停滯，可加入優(yōu)化劑（如25μL/100mL培養(yǎng)基）,。

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