為什么你的光度法LAL檢測結果總出錯,?可能栽在這兩個系數(shù)上
在光度法鱟試劑(LAL)檢測系統(tǒng)中,各類儀器配備的數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計運算功能表面趨同,,但算法差異可能導致結論偏差,,因此,使用者必須深入理解鱟試劑檢測軟件中統(tǒng)計學參數(shù)的計算方式,,避免因算法差異導致結果誤判,。
一、相關系數(shù):衡量線性關系的關鍵指標
相關系數(shù)r表示兩個隨機變量(在光度LAL測試中,,通常是內(nèi)毒素濃度與起始時間或吸光度OD)之間線性關系的強弱與方向,。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)指南明確規(guī)定:“在內(nèi)毒素濃度范圍內(nèi),相關系數(shù)| r |的絕對值必須大于或等于0.980,。”
其計算r的公式如下:
相關系數(shù)的計算基于回歸分析,,主要檢驗平均值與實際Y值之間的關系。在實際應用中,,不同軟件計算相關系數(shù)的方式存在差異,。部分軟件會利用起始時間的每個重復樣本進行計算;而另一些軟件則先計算重復數(shù)據(jù)的平均值,,再對平均值進行回歸分析,。后一種方法通過減少Y值(如起始時間對數(shù))與最佳擬合線之間的偏差,進而得到比使用單個重復樣本更高的r值,。
Pyros Kinetix® Flex細菌內(nèi)毒素定量檢測系統(tǒng)
?三種型號:32孔 / 64孔 / 96孔
?雙重檢測波長:405nm和660nm,,適用于重組法/動態(tài)顯色法/動態(tài)濁度法細菌內(nèi)毒素檢測
?權-威法規(guī):符合USP、ChP,、EP,、JP國際權-威細菌內(nèi)毒素檢測標準
?審計追蹤:嚴格遵循聯(lián)邦法規(guī)21CFR Part 11標準,微軟SQL數(shù)據(jù)庫,,具備數(shù)據(jù)完整性,,自動生成審計追蹤報告
?FDA認證:生成檢測報告可直接用于美國FDA認證申報
?節(jié)約試劑:鱟試劑使用量僅需50µL
?高靈敏度:靈敏度可達0.001EU/mL,實際可達0.0005EU/mL
?溫控精準:37℃±0.1℃
但科德角國際合作企業(yè)美國ACC公司(Associates of Cape Cod)生產(chǎn)的所有軟件均采用前者方法,,該方法能更保守地評估數(shù)據(jù)的線性度,,并主張相關系數(shù)的計算應當結合重復樣本的變異性情況。FDA在1991年的動力學LAL技術指南中亦明確要求:“在計算每個標準品的重復樣品的反應時間之前,,請勿求其平均值,。”
二,、變異系數(shù):反映數(shù)據(jù)離散程度的相對指標
變異系數(shù)(Coefficient of Variation,,簡稱CV)?是衡量數(shù)據(jù)離散程度的相對指標,,它通過標準差與平均值的比值來定義,通常以百分比形式呈現(xiàn),。標準差(Standard Deviation)是統(tǒng)計學中的關鍵指標,,用于反映數(shù)據(jù)的離散程度,體現(xiàn)每個數(shù)據(jù)點與平均值之間的偏離情況,。當所有數(shù)據(jù)點都緊密圍繞平均值時,,標準差(即CV)較小,趨近于零,;反之,,若數(shù)據(jù)點與平均值的距離較大,則標準差較大,,遠離零,;當所有數(shù)據(jù)值完-全相同時,標準差為零,。
在統(tǒng)計分析中,,計算標準差有兩種情況。當對數(shù)據(jù)集合中的每個數(shù)值都進行參數(shù)測量時,,可以計算總體標準差,,它能夠真實反映總體數(shù)據(jù)的離散程度(變異性),計算公式如下:
其中,,∑表示求和操作,,Xi表示每個數(shù)據(jù)點,N是數(shù)據(jù)總量,。
另一種情況是從總體中抽取一定數(shù)量的樣本(n),,通過以下公式估算總體標準差:
在此公式中,除數(shù)采用“n-1”,,“-1”的作用是進行校正,,以彌補樣本可能未能捕捉到的額外變異性。
在LAL檢測中,,當重復樣本數(shù)量有限-時,,應采用樣本標準差公式(分母為n-1),這種校正方式會適度放大CV值,,進而得到更為保守的CV值,,且“-1”對少量重復樣本的影響尤為顯著。例如,,科德角國際的Pyros Kinetix® Flex細菌內(nèi)毒素檢測系統(tǒng)中的Pyros® eXpress軟件即采用此方法,。值得注意的是,,部分軟件可能會使用計算總體標準差的公式(分母為N),,將導致CV值被低估,,但這并不意味著該方法的檢測精度更高,僅僅是數(shù)據(jù)處理方式不同所致,。
CV的應用需嚴格對應檢測目標參數(shù),。在終點法檢測中,內(nèi)毒素濃度與OD值呈正比,,二者具有線性關系,,此時OD值的CV值與內(nèi)毒素濃度的CV值相等。但在動力學檢測中,,起始時間需經(jīng)對數(shù)轉換后建立標準曲線以確定內(nèi)毒素濃度,,因此,起始時間的CV值始終小于內(nèi)毒素濃度的CV值,,若以起始時間CV評估重復性,,可能因兩者非線性關系而產(chǎn)生誤導。因此,,CV計算必須基于內(nèi)毒素濃度均值,,而非起始時間。
三,、總結:明晰計算邏輯,,確保檢測準確
深入了解軟件的計算方式,并確保正確應用相應公式至關重要,。同時,,合理設置規(guī)格標準也不容忽視。若軟件采用樣本標準差公式,,而實驗室沿用基于總體標準差設定的CV標準,,將導致合規(guī)性誤判。唯有明晰數(shù)據(jù)處理路徑,,才能準確解讀結果并科學設定檢測可接受標準
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