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顯微鏡的幾個概念:分辨率,,放大率,最大分辨率,,分辨極限

來源:北京派迪威儀器有限公司   2025年04月29日 16:21  

一,、分辨率

分辨率是指能夠分辨出的相鄰兩個物點間的最小距離的能力,這種距離稱為分辨距離,。

一般來說分辨距離越小,,分辨率越高。一般規(guī)定:顯微鏡或者人眼在25cm處明視距離處,,能夠清楚分辨被檢物體細微結構最小間隔的能力,,稱為分辨率。人眼的分辨距離是100μm,;光學顯微鏡的最大分辨距離是0.2μm,。分辨距離(r)可用以下的公式計算:

r = 0.61 λ/n sinα

其中:n為聚光鏡和物鏡之間介質的折射率(空氣的折射率為1,油為1.5)α為樣品對物鏡角孔徑的半角,,sinα的最大值為1λ為照明光源的波長,;0.61是一個恒定參數

上式中的n sinα的值稱為物鏡的數值孔徑(numerical aperture),,縮寫NA。各種物鏡和聚光鏡的數值孔徑是不同的,,干燥系物鏡NA為0.05~0.95,,油鏡的NA為0.85~1.4。值得注意的是分辨率指的是分辨能力,,而r值指的是分辨距離,,因此r值越小對應的分辨率越高。

二,、最大分辨率

根據分辨率的定義可知,,當r值越小的時候,分辨率越高,。根據公式可得當NA的值越大,,r值越小,分辨率也就越高,。因此當以可見光作為光源時,,我們就可以計算出透鏡的最大分辨率是多少。

要想使得分辨距離盡可能的小,,一方面是使得數值孔徑NA盡可能大,,好的玻璃透鏡的鏡口角大約為70°,空氣折射率為1,,因此NA大約為0.94,。另一方面可以縮短波長,可見光的波長范圍為400~700nm,,以450nm的藍光,,空氣作為介質為例,其最大分辨距離為r=0.61×450/1×0.94≈0.3μm,;若選擇油鏡作為光折射的介質,,則最大分辨距離可提高到0.2μm。

三,、分辨極限和放大率

顯微鏡的分辨極限受可見光波長的限制,,無論怎樣改善透鏡,也不可能克服波長本身所造成的限制,。普通光學顯微鏡下,,能夠清楚分辨的相鄰兩點之間的最小距離為0.2μm,稱為光鏡的分辨極限,。

最終成像的大小和原物體大小的比值稱為放大率,,在顯微鏡中總的放大率等于物鏡放大倍數乘以目鏡的倍數,放大倍數同樣受分辨極限的限制。一般來說,,光鏡的最大放大率只能是透鏡數值孔徑的一千倍,。空氣作為介質時,,最大放大倍數大約為1000倍,。

四、注意事項

文中所提到的分辨率實際上是指分辨能力,,有些資料當中也使用分辨力一詞,。計算分辨距離時,α指的是物鏡角孔徑的半角,,有些材料直接當作角孔徑,,因此在計算的過程中要除以2。最大分辨率等同于最小的分辨距離,,通俗的講就是看的最清楚,,切記不要混淆概念。文中所有的數值均為約數,,數據只是作為例子,,便于理解。

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