特定型號梳子的齒深主要通過影響加樣量,、樣品擴(kuò)散程度、條帶清晰度,、分離效果以及凝膠結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性來對電泳效果產(chǎn)生影響,,具體如下:
加樣量
齒深較深:能形成更深的加樣孔,自然可以容納更多的樣品,。這對于樣品量充足且需要上樣較大體積的情況很有幫助,,例如在蛋白質(zhì)表達(dá)量分析實(shí)驗(yàn)中,較多的樣品可以使檢測結(jié)果更靈敏,,有利于觀察到低表達(dá)量的蛋白質(zhì),。
齒深較淺:加樣孔淺,容納的樣品量就有限,。如果樣品量較多,,可能需要多次加樣,,這不僅操作繁瑣,還可能因多次加樣引入誤差,,如每次加樣量不一致,,導(dǎo)致不同泳道上樣量存在差異,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性,。
樣品擴(kuò)散
齒深較深:樣品在深孔底部的擴(kuò)散空間更大,,從加樣開始到電泳結(jié)束,樣品分子有更多機(jī)會(huì)在孔內(nèi)擴(kuò)散,。尤其是在電泳起始階段,,樣品還未進(jìn)入凝膠基質(zhì)時(shí),擴(kuò)散會(huì)使條帶的起始位置變得模糊,,對后續(xù)準(zhǔn)確測量條帶遷移距離和分析結(jié)果造成一定干擾,。
齒深較淺:淺孔限制了樣品的擴(kuò)散空間,樣品在加樣后能更快地進(jìn)入凝膠進(jìn)行電泳分離,,條帶的起始位置相對清晰,,有利于準(zhǔn)確測量條帶遷移距離,為精確分析樣品的分子量等特性提供了更好的基礎(chǔ),。
條帶清晰度
齒深較深:由于樣品在深孔中擴(kuò)散相對嚴(yán)重,,進(jìn)入凝膠后條帶可能會(huì)變寬,并且深孔使樣品在凝膠中的分布相對較分散,,導(dǎo)致條帶的邊緣不夠清晰,,影響對條帶的觀察和分析,尤其對于分子量相近的樣品,,可能難以準(zhǔn)確區(qū)分,。
齒深較淺:淺孔使樣品在凝膠中的起始分布相對集中,經(jīng)過電泳分離后,,條帶相對狹窄且邊緣清晰,,能夠提高分辨率,更有利于區(qū)分不同分子量的樣品條帶,,對于需要精確判斷條帶位置和大小的實(shí)驗(yàn),,如 DNA 片段的精確分析,淺齒梳子更具優(yōu)勢,。
分離效果
齒深較深:深孔為樣品提供了更多的分離空間,,對于一些分子量較大或結(jié)構(gòu)復(fù)雜的樣品,在電泳過程中可能有更充足的時(shí)間和空間進(jìn)行分離,,減少因空間限制導(dǎo)致的分離不現(xiàn)象,從而在一定程度上提高分離效果,。
齒深較淺:淺孔提供的分離空間相對有限,,對于一些復(fù)雜樣品或高分子量樣品的分離可能不夠充分,。但對于分子量較小且結(jié)構(gòu)簡單的樣品,淺孔通常能夠滿足分離要求,,并且由于其限制了樣品的擴(kuò)散,,反而可能使分離效果更好,條帶更加集中,。
凝膠結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性
齒深較深:深齒梳子在插入和拔出凝膠時(shí),,對凝膠的損傷相對較大。一方面,,插入時(shí)可能會(huì)使凝膠內(nèi)部產(chǎn)生較大的應(yīng)力,,導(dǎo)致凝膠結(jié)構(gòu)出現(xiàn)微小的裂縫或不均勻性;另一方面,,拔出時(shí)也更容易拉扯凝膠,,使加樣孔周圍的凝膠結(jié)構(gòu)變得疏松,這些都會(huì)影響凝膠的整體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,,進(jìn)而影響電泳過程中電場的均勻性和樣品的遷移行為,,降低實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。
齒深較淺:淺齒梳子對凝膠的損傷較小,,插入和拔出過程中引起的凝膠結(jié)構(gòu)變化相對輕微,,凝膠表面相對平整,內(nèi)部結(jié)構(gòu)也較為均勻,,能夠更好地維持電場的均勻性,,保證樣品在電泳過程中的遷移行為較為穩(wěn)定,從而提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和結(jié)果的可靠性,。